Anti-MST1/STK4 Kaninchen-Polyklonaler Antikörper für WB, IF/ICC, IP, ELISA - Q13043

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: MST1/STK4-Funktion und Lokalisierung

• Serin/Threonin-Proteinkinase 4 (STK4), auch bekannt als MST1, KRS2 und YSK3, ist eine stressaktivierte, pro-apoptotische Kinase, die vom STK4-Gen kodiert wird. Sie ist eine Schlüsselkomponente des Hippo-Signalwegs, der die Organgröße kontrolliert und Tumore unterdrückt, indem er die Proliferation einschränkt und Apoptose fördert.
• MST1/STK4 bildet zusammen mit seinem regulatorischen Protein SAV1 den Kern der Hippo-Kinasekaskade, phosphoryliert und aktiviert LATS1/2 im Komplex mit MOB1, was anschließend die YAP1- und TAZ-Onkoproteine phosphoryliert und inaktiviert.
• Nach Caspase-Spaltung während der Apoptose transloziert das aktive Kinfragment in den Zellkern, wo es Histon H2B an Ser-14 (H2BS14ph) phosphoryliert und direkt die Chromatin-Kondensation und DNA-Fragmentierung auslöst.
• MST1/STK4 phosphoryliert mehrere Downstream-Ziele, darunter FOXO3 (fördert Kern-Translokation und Zelltod), FOXO1 (reguliert PMAIP1-Transkription), SIRT1 (hemmt p53-Deacetylierung zur Verstärkung der p53-abhängigen Apoptose) und PKB/AKT1 (wirkt als Inhibitor).
• Es phosphoryliert auch den Androgenrezeptor (AR) an Ser-650, unterdrückt die AR-Aktivität durch Antagonisierung der AR-Chromatin-Komplexbildung und überschneidet sich mit dem AKT1-Signalweg.
• Die subzelluläre Lokalisierung ist primär zytoplasmatisch, aber die gespaltene aktive Kinase tritt unter apoptotischen Bedingungen in den Zellkern ein, um ihre pro-apoptotischen Funktionen auszuüben.
• Während sie ubiquitär exprimiert wird, sind die MST1/STK4-Proteinspiegel in Prostatakrebs von normalen zu malignen Zuständen deutlich erhöht, was auf eine potenzielle Rolle im Fortschreiten von Krebs hindeutet.
• Zu den wichtigsten strukturellen Merkmalen gehören eine N-terminale Serin/Threonin-Kinasedomäne und eine C-terminale regulatorische Domäne mit einer Coiled-Coil-Motif; posttranslationale Modifikationen umfassen Acetylierung und Phosphorylierung, und das Voll-Längen-Protein hat ein vorhergesagtes Molekulargewicht von etwa 56 kDa.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen entspricht den Aminosäuren 303-487 innerhalb der C-terminalen regulatorischen Region von humanem MST1/STK4 und vermeidet die N-terminale Kinasedomäne; daher können die resultierenden polyklonalen Kaninchen-Antikörper Epitope erkennen, die über Spezies hinweg mit hoher Homologie in dieser Region konserviert sind.
• Für Western Blot (WB) ist eine Bande nahe 56 kDa zu erwarten; jedoch kann aufgrund von Caspase-Spaltung während der Apoptose in apoptotischen Proben auch ein kleineres ~36 kDa aktives Fragment nachgewiesen werden – ziehen Sie geeignete Kontrollen in Betracht (z.B. Staurosporin-behandelte Zellen).
• Bei Immunfluoreszenz/Immunzytochemie (IF/ICC) können je nach apoptotischem Zustand der Zellen sowohl zytoplasmatische als auch nukleäre Lokalisierung beobachtet werden; Fixierungs- und Permeabilisierungsmethoden sollten für dieses Ziel optimiert werden.
• Für die Immunpräzipitation (IP) beachten Sie, dass der Antikörper eine polyklonale Präparation ist und möglicherweise Bindungspartner wie SAV1 oder MOB1 mitpräzipitiert; validieren Sie dies in Ihrem Assaysystem mit geeigneten Negativkontrollen.
• Die ELISA-Leistung kann verbessert werden, indem der Antikörper als Beschichtungs- oder Detektionsreagenz verwendet wird, wenn er mit einem geeigneten monoklonalen Capture-Antikörper gepaart wird, der spezifisch für MST1/STK4 ist.
• Für Human, Maus und Ratte wird Kreuzreaktivität berichtet; die Sequenzalignierung der Immunogenregion zeigt eine hohe Konservierung zwischen diesen Spezies, aber für andere Spezies überprüfen Sie die Homologie vor der Verwendung.

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