Anti-MSH6-Kaninchen-polyklonaler Antikörper für WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA – P52701

Zentrale Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung von MSH6

• MSH6 kodiert das DNA-Fehlpaarungsreparaturprotein Msh6, auch bekannt als GTBP, GTMBP oder p160, einen entscheidenden Bestandteil des postreplikativen Fehlpaarungsreparatursystems (MMR).
• Msh6 bildet mit MSH2 ein Heterodimer und formt MutS alpha, den Komplex, der einzelne Basenfehlpaarungen und kleine Insertions-Deletions-Schleifen (IDLs) in der DNA erkennt.
• Nach der Bindung an eine Fehlpaarung durchläuft MutS alpha ATP-abhängige Konformationsänderungen und geht in eine gleitende Klammer über, die entlang des DNA-Rückgrats diffundiert, um das Reparatursignal auszulösen.
• Über seine PWWP-Domäne, die an trimethyliertes „Lys-36“ des Histons H3 (H3K36me3) bindet, wird MSH6 in der G1- und frühen S-Phase an das Chromatin rekrutiert und ermöglicht so eine schnelle Erkennung von Fehlpaarungen während der Replikation.
• MSH6 befindet sich überwiegend im Zellkern und auf den Chromosomen, was mit seiner Rolle bei der Aufrechterhaltung der genomischen Integrität übereinstimmt.
• Mutationen in MSH6 stehen mit dem Lynch-Syndrom (hereditäres nichtpolypöses kolorektales Karzinom, HNPCC5) und einer Prädisposition für verschiedene Krebsarten in Verbindung.
• Posttranslationale Modifikationen, einschließlich Acetylierung und Phosphorylierung, sowie alternatives Spleißen erzeugen mehrere Isoformen, die die MMR-Aktivität möglicherweise fein regulieren.
• Neben der Fehlpaarungsreparatur kann MutS alpha an der homologen Rekombinationsreparatur der DNA beteiligt sein, was seine vielseitige Rolle bei der Aufrechterhaltung des Genoms unterstreicht.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen entspricht der N-terminalen Region (AS 1–100) des menschlichen MSH6; diese Sequenz ist unter Primaten und Nagetieren konserviert, was mit der beobachteten Kreuzreaktivität übereinstimmt.
• Beim Western Blot ist eine Bande von ungefähr 153 kDa zu erwarten. Es sollten geeignete Molekulargewichtsmarker verwendet und die Spezifität mithilfe von Knockout- oder siRNA-Kontrollen überprüft werden.
• Bei der Verwendung in der Immunhistochemie (IHC-P) sollten Methoden zur Antigen-Retrieval getestet werden, beispielsweise die hitzeinduzierte Epitop-Retrieval-Methode, und die Antikörperverdünnungen an positiven und negativen Kontrollgeweben optimiert werden.
• Bei der Immunfluoreszenz (IF/ICC) sollten die Fixierungs- und Permeabilisierungsbedingungen überprüft werden. Die nukleäre Lokalisierung von MSH6 sollte deutlich sichtbar sein, möglicherweise mit einer Assoziation mit dem Chromatin.
• Bei ELISA-Anwendungen kann der Antikörper zum Einfangen oder zum Nachweis verwendet werden. Bei der Entwicklung eines Sandwich-Assays sollte die Kombination mit anderen MSH6-Antikörpern validiert werden.
• Da es sich um einen polyklonalen Antikörper handelt, kann die Chargenkonsistenz variieren. Zur Sicherstellung der Spezifität wird die Einbeziehung einer Positivkontrolle (z. B. HeLa-Zelllysat) und einer Negativkontrolle (z. B. MSH6-Knockout-Zellen) empfohlen.

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