Anti-Maus-Ki67-monoklonaler Antikörper () für die Durchflusszytometrie (intrazellulär) – E9PVX6

Zentrale Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von Ki67

• Ki67, kodiert durch das Mki67-Gen, ist ein großes Proliferationsmarkerprotein mit einem Molekulargewicht von etwa 351 kDa (350864 Da laut UniProt), das mit mitotischen Chromosomen assoziiert. Es wirkt während der frühen Mitose als Chromosomenabstoßer und während der späten Mitose als Chromosomenanzieher und gewährleistet so die korrekte Verteilung und Clusterbildung der Chromosomen (PubMed:27362226). Zugehörige Referenzen: PMID:27362226
• Während der frühen Mitose wird Ki67 von den Nukleolen auf die Chromosomenoberfläche umgelagert und bildet ausgedehnte bürstenartige Strukturen. Diese Strukturen bilden eine sterische und elektrostatische Barriere und wirken als Tensid, um den Kollaps der Chromosomen zu verhindern und eine unabhängige Beweglichkeit zu ermöglichen (PubMed:27362226). Zugehörige Referenzen: PMID:27362226
• In der Anaphase lösen die Dephosphorylierung von Ki67 und die Freilegung eines konservierten basischen Bereichs eine RNA-abhängige Flüssig-Flüssig-Phasentrennung auf der Chromosomenoberfläche aus, wodurch die Clusterbildung der Chromosomen gefördert und der Wiederaufbau des Zellkerns erleichtert wird. Dieser Phasenübergang schaltet Ki67 von einem Abstoßer zu einem Anzieher um.
• Ki67 bindet DNA mit einer Präferenz für superhelikale und AT-reiche DNA und bindet während der Anaphase außerdem an vorzeitig gebildete ribosomale RNAs, was zur Phasentrennung beiträgt. Es trägt jedoch nicht zur inneren Struktur mitotischer Chromosomen bei (PubMed:26949251). Zugehörige Referenzen: PMID:26949251
• Auf subzellulärer Ebene befindet sich Ki67 während der Interphase im Nukleolus und wird während der Mitose auf die Chromosomenoberfläche verlagert. Es wird überwiegend in proliferierenden Zellen exprimiert und dient als zuverlässiger Marker für die Aktivierung des Zellzyklus.
• Zu den posttranslationalen Modifikationen gehören Acetylierung, Phosphorylierung und Ubiquitinierung, die seine mitotischen Funktionen und dynamische Lokalisation regulieren.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Verwenden Sie für die intrazelluläre Durchflusszytometrie eine Permeabilisierungsmethode, die mit nukleären Antigenen kompatibel ist, beispielsweise methanol- oder saponinbasierte Puffer, um den Zugang des Antikörpers zu Ki67 im Nukleolus und auf den Chromosomen sicherzustellen.
• Titrieren Sie den Antikörper im Bereich von 0,1–1 µg pro 10^6 Zellen, um die optimale Färbekonzentration für Ihren spezifischen Zelltyp und Ihr Protokoll zu bestimmen.
• Schließen Sie eine Positivkontrolle, beispielsweise proliferierende Maus-Zelllinien (z. B. NIH/3T3, CTLL-2) oder stimulierte primäre Lymphozyten, sowie eine Negativkontrolle (z. B. Isotypkontrolle oder ruhende Zellen) ein, um die Spezifität der Färbung zu validieren.
• Fixieren Sie die Zellen umgehend, um die Verteilung von Ki67 zu erhalten; eine längere Lagerung kann die Integrität des Epitops beeinträchtigen. Üblicherweise wird eine Paraformaldehyd-Fixierung mit anschließender Permeabilisierung verwendet.
• Das -Konjugat ist mit der Detektion über Standard-Rotlaser (633–647 nm) kompatibel. Stellen Sie bei Multiplexing geeignete Filtersätze und eine minimale Kompensation sicher.

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