Monoklonaler Anti-Maus-CD45R/B220-Antikörper (Biotin) für die Durchflusszytometrie – P06800 / P08575

Zentrale Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von CD45R/B220

• CD45R/B220, kodiert durch Ptprc, ist eine Isoform der rezeptortypischen Tyrosin-Protein-Phosphatase C, auch bekannt als gemeinsames Leukozytenantigen (L-CA), Lymphozytenantigen 5 (Ly-5) oder T200. Es handelt sich um ein Transmembran-Glykoprotein, das hauptsächlich auf hämatopoetischen Zellen exprimiert wird.
• Das Protein ist ein wichtiger Regulator der T-Zell-Aktivierung und wirkt bei der Bindung an DPP4 als positives kostimulatorisches Molekül. Es enthält zwei tandemartig angeordnete intrazelluläre PTPase-Domänen; die erste besitzt enzymatische Aktivität, während die zweite die Substratspezifität moduliert.
• Nach der Aktivierung des T-Zell-Rezeptors rekrutiert CD45 Signalmoleküle wie SKAP1, FYN und LYN und dephosphoryliert diese dadurch. Auf diese Weise wird die Aktivierungsschwelle fein abgestimmt und eine Autoreaktivität verhindert.
• CD45 interagiert an der immunologischen Synapse mit CLEC10A auf antigenpräsentierenden Zellen. Diese Interaktion auf unreifen dendritischen Zellen erkennt Tn-Antigen-tragendes CD45 auf Effektor-T-Zellen und trägt zur peripheren Toleranz bei.
• Die B220-Isoform entsteht durch alternatives Spleißen und wird überwiegend auf B-Lymphozyten sowie einigen aktivierten T-Zellen exprimiert. Sie dient bei Mäusen als klassischer Pan-B-Zell-Marker.
• Auf subzellulärer Ebene ist CD45 an der Zellmembran, in Membranrafts und an der immunologischen Synapse lokalisiert, wo seine Clusterbildung und sein Ausschluss aus Signalmikrodomänen seine Aktivität beeinflussen.
• Zu den posttranslationalen Modifikationen gehört eine umfassende N- und O-verknüpfte Glykosylierung, die seine Konformation und Ligandeninteraktionen beeinflusst.
• Für das Mausprotein wird ein Molekulargewicht von etwa 144 kDa vorhergesagt; aufgrund der Glykosylierung und der Isoformvariationen werden jedoch Banden zwischen 130 kDa und 144 kDa beobachtet.

Experimentelle Hinweise und technische Tipps

• Für die Durchflusszytometrie sollte der biotinylierte Antikörper titriert werden, um die optimale Konzentration für Ihre spezifische Zellpopulation zu bestimmen. Beziehen Sie geeignete Isotypkontrollen ein und stellen Sie bei Bedarf eine Blockierung der Fc-Rezeptoren sicher.
• Da der Antikörper biotinyliert ist, erfordert der Nachweis ein fluorophorkonjugiertes Streptavidin- oder Avidin-Sekundärreagenz. Wählen Sie ein Streptavidin-Konjugat mit minimaler Kreuzreaktivität gegenüber der Spezies Ihrer Probe.
• Validieren Sie die Spezifität der Färbung an bekannten CD45R/B220-positiven und -negativen Zelllinien, beispielsweise an Milzzellen der Maus oder B-Zelllinien, um die Leistungsfähigkeit zu bestätigen.
• Prüfen Sie bei Mehrfarben-Panels die spektrale Überlappung und verwenden Sie Kompensationskontrollen mit Einfachfärbung.
• Alternativ kann der Antikörper nach entsprechender Validierung auch für andere Anwendungen eingesetzt werden; er ist jedoch primär für die Durchflusszytometrie optimiert.

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