Monoklonaler Anti-Maus-CD4-Antikörper (APC/Cyanine7) für die Durchflusszytometrie – P06332

Zentrale Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: CD4-Funktion und -Lokalisation

• Das Cd4-Gen codiert das T-Zell-Oberflächen-Glykoprotein CD4 und produziert ein Typ-I-Transmembranprotein mit vier extrazellulären immunglobulinähnlichen Domänen, einer Transmembranhelix und einem kurzen zytoplasmatischen Schwanz. Das auch als L3T4 oder Ly-4 bekannte Mausprotein weist diese Struktur auf und spielt eine zentrale Rolle in der adaptiven Immunität.
• CD4 fungiert als Korezeptor für MHC-Klasse-II-Moleküle. Auf T-Helferzellen bindet es an denselben MHC-Peptid-Komplex, der vom T-Zell-Rezeptor (TCR) erkannt wird, wodurch die Gesamtavidität der Interaktion erhöht und die T-Zell-Aktivierung erleichtert wird.
• Nach der MHC-Bindung rekrutiert CD4 die Kinase LCK aus der Src-Familie zum TCR-CD3-Komplex. Dies löst Phosphorylierungskaskaden aus, die zur Produktion von Lymphokinen, zur T-Zell-Motilität und -Adhäsion sowie zur vollständigen Aktivierung von T-Helferzellen führen.
• CD4 ist für die Entwicklung von T-Helferzellen im Thymus und für die Differenzierung von Monozyten zu funktionellen Makrophagen unerlässlich. Es ist außerdem an der Aktivierung und Zytokinexpression in Makrophagen, dendritischen Zellen und NK-Zellen beteiligt, häufig unabhängig von TCR/LCK.
• Auf subzellulärer Ebene befindet sich CD4 überwiegend an der Zellmembran, wo es mit Lipidflößen assoziiert ist und posttranslationale Modifikationen wie Palmitoylierung, N-Glykosylierung und Phosphorylierung durchläuft. Diese Modifikationen regulieren seine Membranlokalisation und Signalübertragungsfunktionen.
• Gewebespezifität bei der Maus: CD4 wird stark auf T-Helferzellen exprimiert und ist außerdem in geringeren Mengen auf Makrophagen, dendritischen Zellen und NK-Zellen vorhanden. Seine Expression ist ein Kennzeichen der T-Helferzell-Linie.
• Das Protein ist ein Mitglied der Immunglobulinsuperfamilie und enthält mehrere Disulfidbrücken. Diese Merkmale tragen zu seiner strukturellen Stabilität und seiner Fähigkeit zur Interaktion mit seinen Liganden bei.

Experimentelle Hinweise und technische Tipps

• Da es sich beim Immunogen um ein rekombinantes Protein handelt, erkennt der Antikörper möglicherweise ein lineares Epitop. Dies sollte bei der Antigenrückgewinnung oder bei denaturierenden Western Blots berücksichtigt werden, obwohl dieser Antikörper für die nicht denaturierende Durchflusszytometrie empfohlen wird.
• Für die Durchflusszytometrie sollte der Antikörper titriert werden, um die optimale Konzentration für die jeweilige Zellpopulation zu bestimmen. Bei Verwendung der APC/Cyanine7-Fluoreszenz sollten geeignete Isotypkontrollen und Einkanal-Kompensationskontrollen eingeschlossen werden.
• Bereiten Sie Einzelzellsuspensionen aus lymphatischen Organen (Milz, Lymphknoten, Thymus) oder peripherem Blut vor und blockieren Sie Fc-Rezeptoren, um vor der Färbung eine unspezifische Bindung zu minimieren.
• Validieren Sie die Expression im relevanten Mausstamm und Gewebe. Beachten Sie, dass CD4 stark auf T-Helferzellen exprimiert wird, aber auch auf Untergruppen von Makrophagen, dendritischen Zellen und NK-Zellen nachgewiesen werden kann.

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