Anti-Maus CD3 monoklonaler Antikörper für Durchflusszytometrie - P04235 / P22646

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: CD3-Funktion und Lokalisierung

• Das Zielprotein, CD3δ (T-Zell-Oberflächenglykoprotein CD3-Delta-Kette), ist eine Kernkomponente des auf der Oberfläche von T-Lymphozyten vorhandenen TCR-CD3-Komplexes, wo es eine wesentliche Rolle bei adaptiven Immunantworten spielt.
• Zusammen mit CD3ε, CD3γ und CD247/CD3ζ überträgt CD3δ TCR-vermittelte Signale über die Zellmembran, nachdem der T-Zell-Rezeptor (TCR) ein Antigen erkannt hat, und löst nachgeschaltete Signalwege aus.
• Alle CD3-Ketten enthalten immunrezeptor-tyrosinbasierte Aktivierungsmotive (ITAMs) in ihren zytoplasmatischen Domänen. Nach TCR-Engagement werden diese ITAMs durch die Src-Familienkinasen LCK und FYN phosphoryliert, was zur Aktivierung von Signalkaskaden führt.
• CD3δ spielt eine kritische Rolle bei der Thymozytendifferenzierung, indem es die korrekte intrazelluläre Zusammenbau und Oberflächenexpression des TCR-CD3-Komplexes sicherstellt; ohne einen funktionellen Komplex differenzieren sich Thymozyten nicht ordnungsgemäß. Verwandte Referenzen: PMID:10935641
• CD3δ interagiert mit den Korezeptoren CD4 und CD8 und stellt eine funktionelle Verbindung zwischen dem TCR und diesen Molekülen her, die für die Aktivierung und positive Selektion von CD4+- oder CD8+-T-Zellen erforderlich ist.
• Das CD3δ-Protein ist ein transmembranes Glykoprotein mit einem Signalpeptid, einer einzelnen Transmembranhelix und einer zytoplasmatischen ITAM-haltigen Domäne. Es unterliegt der Phosphorylierung und der Bildung von Disulfidbrücken.
• CD3ε, das zweite von diesem Antikörper erkannte Ziel, weist strukturelle und funktionelle Ähnlichkeiten mit CD3δ auf und ist ebenfalls Teil des TCR-CD3-Komplexes und trägt zur Signalübertragung und T-Zell-Entwicklung bei.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches Peptid, das von Maus-CD3 abgeleitet ist, was darauf hindeutet, dass der Antikörper wahrscheinlich ein lineares Epitop erkennt, das zwischen der δ- und ε-Kette konserviert ist, was seiner dualen Reaktivität entspricht.
• Für die Durchflusszytometrie (FC) sollten Sie eine Titrierung des Antikörpers in Betracht ziehen, um die optimale Konzentration für Ihre spezifische Maus-Lymphozytenpopulation zu ermitteln. Validieren Sie die Färbung sowohl in ruhenden als auch in aktivierten T-Zell-Proben.
• Da es sich um einen monoklonalen Ratten-Antikörper handelt, stellen Sie sicher, dass geeignete sekundäre Anti-Ratten-Nachweisreagenzien oder direkte Konjugationsstrategien verwendet werden, wenn Sie ihn in Multiplex-Assays mit anderen Antikörpern kombinieren.
• Aufgrund der vorhergesagten Molekulargewichte (19 kDa für CD3δ, 21 kDa für CD3ε) eignet sich der Antikörper möglicherweise auch für Western Blotting unter denaturierenden Bedingungen, obwohl die Daten des Herstellers FC unterstützen. Erwägen Sie eine interne Validierung, wenn Sie zusätzliche Anwendungen erkunden.

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