Monoklonaler Anti-Maus-CD274/PD-L1-Antikörper () für die Durchflusszytometrie – Q9EP73

Zentrale Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von CD274/PD-L1

• CD274, auch als PD-L1 oder B7-H1 bekannt, ist ein Transmembranprotein vom Typ I, das zur Immunglobulinsuperfamilie gehört.
• Es fungiert als Ligand für den inhibitorischen Rezeptor PDCD1/PD-1 und spielt eine entscheidende Rolle bei der Aufrechterhaltung der Immuntoleranz, indem es die Effektorantworten von T-Zellen begrenzt. Zugehörige Referenzen: PMID:11238124
• Über einen bislang nicht definierten Rezeptor kann es bestimmte T-Zell-Subpopulationen kostimulieren, die überwiegend Interleukin-10 (IL10) produzieren. Zugehörige Referenzen: PMID:11015443 PMID:12719480
• Tumoren nutzen den PD-1/PD-L1-Signalweg, um die Funktion zytotoxischer T-Lymphozyten (CTL) zu hemmen und der Immunzerstörung zu entgehen. Die Blockade dieser Interaktion kann die T-Zell-Erschöpfung umkehren und die Antitumorimmunität verstärken. Zugehörige Referenzen: PMID:12218188 PMID:27281199
• PD-L1 ist an der Zellmembran lokalisiert und durchläuft außerdem frühe und recycelnde Endosomen.
• Es wird in Herz, Thymus, Skelettmuskulatur und Lunge stark exprimiert und induzierbar auf aktivierten dendritischen Zellen, B-Zellen, Makrophagen und verschiedenen Tumorzelllinien exprimiert.
• Zu den posttranslationalen Modifikationen gehören N-Glykosylierung, Disulfidbrückenbildung und Ubiquitinierung, die seine Stabilität und Funktion modulieren.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Für die Durchflusszytometrie sollte der Antikörper titriert werden, um die optimale Konzentration für den jeweiligen Zelltyp und die spezifischen Versuchsbedingungen zu bestimmen.
• Verwenden Sie geeignete Isotypkontrollen und Kompensationskontrollen, wenn eine Multiplexanalyse mit anderen Fluorophoren durchgeführt wird.
• Erwägen Sie die Verwendung von Fc-Rezeptor-Blockierungsreagenzien, um die unspezifische Bindung in Mausproben zu minimieren.
• Da das Immunogen der extrazellulären Domäne entspricht, ist zu erwarten, dass der Antikörper natives PD-L1 auf der Zelloberfläche erkennt; zum Nachweis der Oberflächenexpression wird eine Färbung von Lebendzellen empfohlen.
• Obwohl der Antikörper für die Durchflusszytometrie validiert ist, sollte bei der Anwendung für andere Techniken wie den Western Blot beachtet werden, dass die Glykosylierung ein scheinbares Molekulargewicht verursachen kann, das über den vorhergesagten 32 kDa liegt; eine zusätzliche Validierung wäre erforderlich.

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