Anti-MLKL monoklonaler Antikörper für WB, IHC-P, ELISA – Q8NB16

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung von MLKL

• MLKL (Mixed lineage kinase domain-like protein) ist eine Pseudokinase, die eine entscheidende Rolle bei der durch Tumornekrosefaktor (TNF) induzierten Nekroptose spielt – einem programmierten Zelltodweg, der sich von der Apoptose unterscheidet. Zugehörige Referenzen: PMID:22265413, PMID:22265414, PMID:22421439
• Es besitzt keine intrinsische Proteinkinase-Aktivität und wirkt downstream von RIPK3. Nach der Phosphorylierung durch RIPK3 bildet MLKL Homotrimere und wandert zur Plasmamembran, wo es einen Kalziumeinstrom und Membranschäden induziert, um die nekroptotische Zelltodausführung zu vollziehen. Zugehörige Referenzen: PMID:22265413, PMID:22265414, PMID:22421439
• MLKL vermittelt auch durch Virusinfektionen ausgelöste nukleäre Nekroptose. Nach der Aktivierung durch ZBP1 phosphoryliert nukleäres RIPK3 MLKL, was zu einer Zerstörung der Kernhülle und dem Austritt zellulärer DNA ins Zytosol führt.
• Das Protein bindet hoch phosphorylierte Inositolphosphate wie Inositolhexakisphosphat (InsP6), was für seine nekroptotische Funktion essenziell ist. Zugehörige Referenzen: PMID:29883610
• MLKL ist im Zytoplasma, an der Zellmembran und im Zellkern lokalisiert – was mit seiner dynamischen Rolle bei der Signalübertragung und Zelltodausführung übereinstimmt.
• Durch alternatives Spleißen entstehen mehrere MLKL-Isoformen, die potenziell zur regulatorischen Vielfalt beitragen.
• Mit MLKL verbundene Schlüsselwörter sind ATP-Bindung, Coiled-Coil, Nekrose, Phosphoprotein und Nukleotidbindung, was seine Strukturdomänen und Rolle bei der Nekroptose-Signalübertragung widerspiegelt.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Der Antikörper wurde gegen ein synthetisches Peptid des menschlichen MLKL erzeugt; er kann sowohl denaturierte als auch native Formen erkennen und unterstützt Anwendungen wie Western Blotting (WB) und ELISA.
• Im Western Blot ist bei menschlichem und murinem MLKL eine Bande bei etwa 54 kDa zu erwarten; verwenden Sie geeignete Positivkontrollen, um die Spezifität zu bestätigen.
• Für die Immunhistochemie (IHC-P) müssen gegebenenfalls die Bedingungen zur Antigen-Retrieval optimiert werden, und eine Validierung anhand bekannter positiver Gewebeschnitte wird empfohlen.
• Die Kreuzreaktivität des Antikörpers mit murinem MLKL ermöglicht dessen Verwendung in Mausmodellen der Nekroptose; dennoch sollte die Leistungsfähigkeit im entsprechenden experimentellen System validiert werden.
• Da MLKL ein Phosphoprotein ist, berücksichtigen Sie die Rolle der Phosphorylierung in Ihrem experimentellen Kontext, da aktivierungsinduzierte Modifikationen die Detektion beeinträchtigen können.
• Für Nekroptose-Assays erfordert die Induktion der MLKL-Aktivierung typischerweise kombinierte Behandlungen (z. B. TNF-α, Smac-Mimetikum und ein Caspase-Inhibitor); bestätigen Sie den Aktivierungsstatus mit geeigneten Kontrollen.

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