Anti-MLH1 monoklonaler Antikörper (KO validiert) für WB, ELISA – P40692

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung des DNA-Mismatch-Reparaturproteins Mlh1

• MLH1 kodiert für das DNA-Mismatch-Reparaturprotein Mlh1 (MutL-Protein-Homolog 1), eine Schlüsselkomponente des postreplikativen DNA-Mismatch-Reparatursystems (MMR). Es ist auch unter verschiedenen Aliassen wie FCC2, COCA2 und HNPCC bekannt.
• MLH1 bildet mit PMS2 ein Heterodimer, das MutL-Alpha bildet. Nach der Erkennung von Fehlpaarungen durch MutS-Alpha (MSH2-MSH6) oder MutS-Beta (MSH2-MSH3) wird MutL-Alpha an den Heteroduplex rekrutiert. In Gegenwart von RFC und PCNA aktiviert es die Endonukleaseaktivität von PMS2 und führt in der Nähe der Fehlpaarung zu Einzelstrangbrüchen, um die strangspezifische Degradation durch EXO1 zu erleichtern.
• MLH1 bildet auch mit MLH3 ein Heterodimer (MutL-Gamma), das an der meiotischen Rekombination beteiligt ist.
• Das Protein ist im Kern lokalisiert und assoziiert mit Chromosomen, was mit seiner Rolle bei der DNA-Reparatur und der Erhaltung der genomischen Integrität übereinstimmt.
• Die Gewebeexpression ist breit gefächert, wobei höhere Spiegel in Dickdarm, Lymphozyten, Brust, Lunge, Milz, Hoden, Prostata, Schilddrüse, Gallenblase und Herz nachgewiesen werden.
• Posttranslationale Modifikationen umfassen Acetylierung, Phosphorylierung und Ubiquitinierung. MLH1 ist an der DNA-Schadenssignalisierung beteiligt, die nach schwerer DNA-Schädigung einen Zellzyklusarrest oder Apoptose induzieren kann. Es wird als Tumorsuppressor klassifiziert, und Mutationen in MLH1 sind mit hereditärem nichtpolyposösem kolorektalem Karzinom (HNPCC) verbunden.

Experimentelle Anleitung und technische Hinweise

• Das verwendete Immunogen ist rekombinantes menschliches MLH1-Protein, was Antikörper ergeben kann, die native und denaturierte Formen erkennen. Im Western Blot ist eine spezifische Bande um 85 kDa in Lysaten menschlicher Zellen oder Gewebe zu erwarten. Es wird die Einbeziehung einer knockout (KO) validierten Kontrollprobe empfohlen, um die Spezifität des Antikörpers zu bestätigen.
• Für ELISA-Anwendungen kann der Antikörper zur Antigenfangnahme oder -detektion verwendet werden; erwägen Sie die Paarung mit einem anderen Klon, der auf eine andere Epitopgruppe abzielt, für die Entwicklung eines Sandwich-ELISA. Verwenden Sie rekombinantes MLH1-Protein als Standard für die Quantifizierung.
• Aufgrund der nukleären Lokalisation von MLH1 können geeignete Protokolle zur Kernextraktion die Nachweisempfindlichkeit im Western Blot bei Verwendung von Ganzzellysaten verbessern.

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