Anti-MITF monoklonaler Antikörper für WB, IHC-P, ELISA - O75030

Wichtige Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: MITF-Funktion und Lokalisierung

• MITF (Microphthalmia-associated transcription factor) ist ein Mitglied der Familie der basischen Helix-Loop-Helix-Leucin-Zipper (bHLH-Zip)-Transkriptionsfaktoren, kodiert durch das MITF-Gen (auch als BHLHE32 bezeichnet).
• Dient als Hauptregulator für das Überleben von Melanozyten, die Differenzierung und die Melanosomen-Biogenese durch Bindung an M-Box (5'-TCATGTG-3') und E-Box (5'-CACGTG-3') DNA-Sequenzen in den Promotoren von Pigmentierungsgene wie TYR und TYRP1 (PubMed:10587587, PubMed:22647378, PubMed:27889061). Zugehörige Referenzen: PMID:10587587 PMID:22647378 PMID:27889061
• Beteiligt sich an der zellulären Reaktion auf die Verfügbarkeit von Aminosäuren über den MTOR-Signalweg: Unter nährstoffreichen Bedingungen phosphoryliert MTOR MITF, was zu dessen Inaktivierung führt; umgekehrt hemmt Hunger oder lysosomaler Stress MTOR, was die Dephosphorylierung und transkriptionelle Aktivierung von MITF fördert (PubMed:36608670). Zugehörige Referenzen: PMID:36608670
• Lokalisiert überwiegend im Zellkern, wird aber auch im Zytoplasma und auf Lysosomenmembranen nachgewiesen, was seine Rollen in der Transkription und Signalübertragung widerspiegelt.
• Wird in Melanozyten, dem retinalen Pigmentepithel, Gehirn, der Plazenta und Niere exprimiert, wobei die Expression in Melanozyten entscheidend für die Pigmentierung und damit verbundene Erkrankungen ist.
• Mehrere Isoformen, die durch alternatives Spleißen entstehen, beeinflussen die Gewebeverteilung und funktionelle Spezifität; Mutationen in MITF sind mit dem Waardenburg-Syndrom Typ 2A, dem Tietz-Syndrom und dem COMMAD-Syndrom assoziiert.
• Stark reguliert durch posttranslationale Modifikationen, einschließlich Phosphorylierung und Ubiquitinierung, die seine Stabilität, DNA-Bindungsaffinität und transkriptionelle Aktivität modulieren.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen entspricht den Aminosäuren 402-526 des humanen MITF (NP_001341533.1), einer Region, die das Leucin-Zipper-Dimerisierungsmotiv enthält; prüfen Sie die Isoform-Reaktivität und die Epitop-Zugänglichkeit in Ihrem experimentellen System.
• Für Western Blot (WB) hat MITF ein vorhergesagtes Molekulargewicht von etwa 59 kDa, jedoch können mehrere Isoformen und posttranslationale Modifikationen zusätzliche Banden erzeugen; validieren Sie dies mit geeigneten Positivkontrollen (z. B. pigmentierte Melanom-Zelllinien) und Ladekontrollen.
• Für die Immunhistochemie (IHC-P) sollten Antigen-Retrieval-Bedingungen und Antikörperverdünnung empirisch bestimmt werden; pigmentierte Gewebe wie Haut oder uveales Melanom können als Positivkontrollen dienen.
• Für ELISA werden vorläufige Schachbrett-Titrationen empfohlen, um optimale Beschichtungs- und Detektionsbedingungen zu ermitteln; die Paarung mit validierten Fänger-Antikörpern kann die Sensitivität verbessern.
• Da MITF ein Transkriptionsfaktor mit geringer Abundanz ist, können Probenanreicherung oder hochempfindliche Detektionsmethoden für einen zuverlässigen Nachweis in einigen Probentypen erforderlich sein.

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