Anti-METTL8-Kaninchen-polyklonaler Antikörper für WB, ELISA – Q9H825

Zentrale Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von METTL8

• METTL8 (methyltransferase-like protein 8) ist auch als mitochondriale tRNA-N(3)-Cytidin-Methyltransferase METTL8 und als mRNA-N(3)-Methylcytidin-Methyltransferase METTL8 bekannt. Es gehört zur Methyltransferase-Superfamilie und nutzt S-Adenosyl-L-Methionin (SAM) als Methylgruppendonor.
• Als mitochondriales Enzym katalysiert METTL8 spezifisch die N(3)-Methylcytidin-(m3C)-Modifikation an Position 32 der Anticodon-Schleife der mitochondrialen tRNA(Ser)(UCN) und tRNA(Thr). Diese Modifikation ist entscheidend für die Effizienz der mitochondrialen Translation und eine ordnungsgemäße Funktion der Atmungskette. Zugehörige Referenzen: PMID:34774131, PMID:35017528
• Die Methylierungsaktivität von METTL8 an mitochondrialer tRNA(Ser)(UCN) erfordert eine vorherige N(6)-Dimethylallyladenosin(37)-(i6A37)-Modifikation durch das Enzym TRIT1, was auf einen hierarchischen Modifikationsweg hindeutet. Zugehörige Referenzen: PMID:34774131, PMID:35017528
• Es wurde berichtet, dass METTL8 die m3C-Modifikation bestimmter mRNAs vermittelt. Die Häufigkeit und biologische Bedeutung dieser Aktivität in vivo sind jedoch weiterhin unklar und müssen weiter validiert werden. Zugehörige Referenzen: PMID:28655767, PMID:33313824
• Auf subzellulärer Ebene befindet sich METTL8 überwiegend in den Mitochondrien, was mit seiner Funktion bei der mitochondrialen tRNA-Modifikation übereinstimmt. Das Protein besitzt ein Transitpeptid für den Import in die Mitochondrien.
• Das METTL8-Gen durchläuft alternatives Spleißen, wodurch möglicherweise mehrere Isoformen entstehen. UniProt führt die überprüfte Isoform mit einem Molekulargewicht von ungefähr 33,4 kDa.
• Zu den wichtigen Proteinmerkmalen gehören die Bildung von Isopeptidbindungen, die Ubl-Konjugation sowie die Zuordnung zu den Bereichen tRNA-Verarbeitung und mitochondriale Funktionen.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das für diesen Antikörper verwendete Immunogen ist ein rekombinantes Protein, das die N-terminale Region (Aminosäuren 1–140) des humanen METTL8 abdeckt. Diese Region kann Teile des Transitpeptids und der frühen katalytischen Domäne enthalten.
• Für Western-Blot-(WB)-Anwendungen sollten mitochondrienangereicherte Lysate oder Gesamtzellextrakte aus menschlichen, Maus- oder Rattenproben verwendet werden. Das vorhergesagte Molekulargewicht beträgt etwa 33 kDa, jedoch können posttranslationale Modifikationen oder Unterschiede zwischen Isoformen zu einer Verschiebung der Bande führen.
• Im ELISA kann dieser polyklonale Antikörper natives und denaturiertes METTL8 nachweisen. Die Signalspezifität sollte mit geeigneten Kontrollen validiert werden, beispielsweise mit METTL8-Knockdown- oder Knockout-Zelllinien.
• Eine Kreuzreaktivität mit METTL8 von Maus und Ratte wurde angegeben. Die Sequenzhomologie sollte jedoch überprüft und die optimalen Arbeitsbedingungen in Ihrem experimentellen System empirisch bestimmt werden.
• Für Funktionsstudien zum Zusammenhang zwischen METTL8, mitochondrialer Translation und der Aktivität der Atmungskette sollte die Verwendung dieses Antikörpers in Verbindung mit Verfahren zur Mitochondrienisolierung und Aktivitätsassays in Betracht gezogen werden.

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