Anti-Mesothelin Kaninchen-polyklonaler Antikörper für WB, ELISA – Q13421

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von Mesothelin

• Mesothelin wird durch das MSLN-Gen kodiert und als Vorläuferprotein gebildet, das in zwei Produkte gespalten wird: den megakaryozytenpotenzierenden Faktor (MPF) und das reife membrangebundene Mesothelin.
• Membranverankertes Mesothelin könnte eine Rolle bei der zellulären Adhäsion spielen und möglicherweise an Zell-Zell- oder Zell-Matrix-Wechselwirkungen beteiligt sein.
• Der megakaryozytenpotenzierende Faktor (MPF) wirkt als Zytokin, das die Bildung von Megakaryozytenkolonien in vitro verstärken kann – dies deutet auf eine Rolle bei der Hämatopoese hin.
• Das Protein lokalisiert über einen GPI-Anker an der Zellmembran und kommt außerdem im Golgi-Apparat und in sezernierter Form nach Spaltung und Freisetzung vor.
• Mesothelin wird in Mesothelzellen exprimiert, die Pleura, Peritoneum und Perikard auskleiden; in geringeren Mengen kommt es in Lunge, Herz, Plazenta und Niere vor.
• Es ist in Mesotheliomen, Ovarialkarzinomen und einigen Plattenepithelkarzinomen stark überexprimiert, was es zu einem nützlichen Tumormarker und therapeutischen Ziel macht.
• Posttranslationale Modifikationen umfassen Disulfidbindungsbildung, N-verknüpfte Glykosylierung und GPI-Ankerbindung – diese sind entscheidend für seine Stabilität und Membranassoziation.
• Alternatives Spleißen, Phosphorylierung und proteolytische Spaltungsereignisse regulieren seine multiplen funktionellen Formen und subzellulären Verteilungen.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen entspricht der extrazellulären Domäne (AS 296–606) des humanen Mesothelins, die bei der Maus konserviert ist (basierend auf der Kreuzreaktivität), sodass es für die Detektion von Proben sowohl vom Menschen als auch von der Maus in WB und ELISA geeignet ist.
• Beim Western Blot ist zu beachten, dass das vollständige Vorläuferprotein (~69 kDa) gespalten wird, sodass abhängig von der Probe mehrere Banden auftreten können (z. B. ~40 kDa reifes Mesothelin und ~31 kDa MPF). Validieren Sie mit rekombinantem Protein oder Lysaten aus hoch exprimierenden Zelllinien (z. B. Ovarialkarzinomlinien wie OVCAR-3 oder Mesotheliomlinien).
• Im ELISA kann der Antikörper als Capture- oder Nachweisreagenz verwendet werden; die optimale Beschichtungskonzentration und die Paarung mit einem Nachweisantikörper sollten empirisch ermittelt werden, idealerweise unter Verwendung von rekombinantem Mesothelin als Standard.
• Als polyklonaler Antikörper kann es zu Charge-to-Charge-Variabilitäten kommen; führen Sie immer einen Vorversuch mit positiven und negativen Kontrollen durch, um Reaktivität und Spezifität zu bestätigen.
• Beachten Sie, dass endogenes lösliches MPF in Serum oder Zellkulturüberständen nachgewiesen werden könnte; passen Sie Blockierungs- und Waschbedingungen entsprechend an, um Hintergrundsignal zu reduzieren.

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