Polyklonaler Anti-Mesothelin-Antikörper für WB, IF-P, IHC-P, ELISA - Q13421

Zentrale Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von Mesothelin

• Mesothelin, auch als CAK1-Antigen oder Prä-Pro-Megakaryozyten-potenzierender Faktor bekannt, wird vom MSLN-Gen kodiert und liegt durch alternatives Spleißen in mehreren Isoformen vor.
• Das Protein wird als Vorläufer synthetisiert, der in ein membranverankertes, GPI-verknüpftes reifes Mesothelin und einen sekretierten Megakaryozyten-potenzierenden Faktor (MPF) gespalten wird.
• Es wird angenommen, dass membranverankertes Mesothelin eine Rolle bei der Zelladhäsion spielt und möglicherweise Interaktionen zwischen Mesothelzellen und anderen Zelltypen vermittelt.
• MPF, das sekretierte Fragment, wurde ursprünglich aufgrund seiner Fähigkeit identifiziert, die Bildung von Megakaryozytenkolonien in vitro zu fördern.
• Auf subzellulärer Ebene lokalisiert Mesothelin über seinen GPI-Anker an der Zellmembran sowie während der Biosynthese am Golgi-Apparat; das MPF-Fragment wird extrazellulär sekretiert.
• Die Gewebeexpression ist in Lunge und Mesothelzellen am stärksten ausgeprägt, mit niedrigeren Werten in Herz, Plazenta und Niere; auf Proteinebene ist Mesothelin in Mesotheliomen, Ovarialkarzinomen und bestimmten Plattenepithelkarzinomen stark überexprimiert.
• Zu den wichtigsten posttranslationalen Modifikationen gehören N-Glykosylierung, Disulfidbrückenbildung, Phosphorylierung und die Anheftung des GPI-Ankers, die alle zu seinen strukturellen und funktionellen Eigenschaften beitragen.
• Die UniProt-Schlüsselwörter weisen auf seine Beteiligung an der Zelladhäsion, seine Membranassoziation und seine Krankheitsrelevanz durch aberrante Expression in Krebszellen hin.

Experimentelle Anleitung und technische Hinweise

• Das Immunogen wurde gegen die Aminosäuren 296–606 des humanen Mesothelins entwickelt und deckt die extrazelluläre Domäne ab; diese Region kann teilweise mit dem MPF-Fragment geteilt sein, wodurch möglicherweise beide Formen nachgewiesen werden können.
• Beim Western Blot wird für den vollständigen Vorläufer oder die membranverankerte Form eine Bande bei etwa 69 kDa erwartet; zusätzliche Banden im Bereich von 30–40 kDa könnten das abgespaltene MPF-Fragment darstellen.
• Bei der Durchführung von IHC-P sollte eine Antigenrückgewinnung bei pH 6 oder 9 in Betracht gezogen und die Färbespezifität anhand von Mesothel- oder Ovarialkarzinom-Gewebeschnitten validiert werden, von denen bekannt ist, dass sie Mesothelin stark exprimieren.
• Für IF-P sollten die Zellen mit Paraformaldehyd fixiert und angemessen permeabilisiert werden; bestätigen Sie die Signallokalisation an der Zellmembran und am Golgi-Apparat.
• Validieren Sie die Reaktivität mit humanen, murinen und Rattenproben anhand bekannter positiver und negativer Zelllinien, z. B. OVCAR-3 (humanes Ovarialkarzinom) oder AB22 (murines Mesotheliom) als Positivkontrollen.
• Bei ELISA-Anwendungen kann es sinnvoll sein, sowohl Capture- als auch Detektionsformate mit rekombinantem Mesothelin-/MPF-Protein als Standard zu testen.
• Beachten Sie, dass der Antikörper sowohl membrangebundenen als auch löslichen Formen nachweisen kann; berücksichtigen Sie die Probenvorbereitung (Zelllysat gegenüber konditioniertem Medium), um diese zu unterscheiden.

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