Anti-Mesothelin monoklonaler Antikörper für WB, IHC-P, ELISA - Q13421

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: Mesothelin-Funktion und -Lokalisation

• Mesothelin ist ein Zelloberflächen-Glykoprotein, das vom MSLN-Gen kodiert wird, auch bekannt als MPF (Megakaryozyten-potenzierender Faktor) oder CAK1-Antigen.
• Das Voll-Längen-Protein wird als 71 kDa Vorläufer synthetisiert, der einer proteolytischen Spaltung unterzogen wird, um eine 31 kDa N-terminale sekretierte Form (Megakaryozyten-potenzierender Faktor, MPF) und ein 40 kDa C-terminales membrangebundenes Mesothelin zu ergeben.
• Membrangebundenes Mesothelin ist über einen Glycosylphosphatidylinositol (GPI)-Anker an der Zelloberfläche verankert und an Zelladhäsion beteiligt.
• MPF wird sekretiert und konnte in vitro die Bildung von Megakaryozyten-Kolonien potenzieren, was auf eine Rolle in der Hämatopoese hindeutet.
• Mesothelin wird hauptsächlich in Mesothelzellen exprimiert, die Pleura, Perikard und Peritoneum auskleiden, und kommt auch in geringeren Mengen in Lunge, Herz, Plazenta und Niere vor.
• Es ist in mehreren humanen Krebsarten stark überexprimiert, einschließlich Mesotheliomen, Ovarialkarzinomen und einigen Plattenepithelkarzinomen, was es zu einem Ziel für Krebsdiagnostik und -therapie macht.
• Das Protein durchläuft mehrere post-translationale Modifikationen, einschließlich Glykosylierung, Disulfidbrückenbildung und Phosphorylierung, die für seine Stabilität und Funktion entscheidend sind.
• Subzellulär lokalisiert Mesothelin an der Zellmembran, im Golgi-Apparat und kommt auch in sekretierten Formen vor.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen umfasst die C-terminale Region (Aminosäuren 296–606) von humanem Mesothelin, die der reifen membrangebundenen Form entspricht; daher wird erwartet, dass der Antikörper sowohl den Voll-Längen-Vorläufer als auch die gespaltene membrangebundene Untereinheit im Western Blot detektiert.
• Für den Western Blot sollten reduzierende Bedingungen in Betracht gezogen werden, da Disulfidbrücken die Wanderung beeinflussen können; das vorhergesagte Molekulargewicht des reifen Membran-Mesothelins beträgt etwa 40 kDa, aber aufgrund von Glykosylierung können Banden bei höheren Molekulargewichten beobachtet werden.
• Bei der Immunhistochemie (IHC-P) sollten die Antigen-Demaskierung optimiert und in Mesothel- oder Tumorgewebeschnitten validiert werden, von denen bekannt ist, dass sie Mesothelin überexprimieren, wie z.B. Mesotheliom- oder Ovarialkarzinom-Biopsien.
• Für ELISA, kombinieren Sie mit einem Capture-Antikörper, der auf ein nicht-überlappendes Epitop abzielt, um Mesothelin-Spiegel in Serum oder Zellkulturüberständen zu bewerten; beachten Sie, dass die lösliche MPF-Form ebenfalls detektiert werden kann, wenn das Epitop in der N-terminalen Region vorhanden ist.

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