Anti-ME2-Polyklonaler Antikörper für WB, ELISA - P23368

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: ME2-Funktion und -Lokalisierung

• ME2 (NAD-abhängige Apfelsäure-Enzym, mitochondrial) ist auch bekannt als ODS1 und Malic Enzym 2. Es wird beim Menschen durch das ME2-Gen kodiert.
• Dieses Enzym katalysiert die oxidative Decarboxylierung von Malat zu Pyruvat unter Verwendung von NAD+ als Kofaktor. Die Reaktion ist entscheidend für die Verknüpfung des TCA-Zyklus mit dem Pyruvat-Stoffwechsel und der NADH-Produktion.
• ME2 ist ein allosterisches Enzym und benötigt für seine Aktivität zweiwertige Metallionen, typischerweise Mg2+ oder Mn2+, welche die Substratbindung und Katalyse erleichtern.
• Das Protein lokalisiert sich in die mitochondriale Matrix, wo es am Malat-Stoffwechsel fungiert. Es wird über ein N-terminales Transitpeptid in die Mitochondrien importiert, das nach der Translokation abgespalten wird.
• Alternatives Spleißen erzeugt mehrere Transkriptvarianten, was potenziell zu Isoformen mit unterschiedlichen regulatorischen Eigenschaften oder Expressionsmustern führen kann.
• Posttranslationale Modifikationen umfassen Acetylierung, welche die Enzymaktivität oder -stabilität als Reaktion auf den zellulären Stoffwechselzustand regulieren kann.
• ME2 ist weit verbreitet exprimiert, spielt aber spezialisierte Rollen in Geweben mit hoher mitochondrialer Aktivität, wie Leber, Herz und Gehirn, wo es zum Lipid- und Aminosäurestoffwechsel beiträgt.
• Schlüsselwörter von UniProt heben seine Merkmale hervor: 3D-Struktur (Strukturdaten verfügbar), Acetylierung, allosterisches Enzym, alternatives Spleißen, direkte Proteinsequenzierung, Metallbindung, Mitochondrium, NAD, Oxidoreduktase und Referenzproteom.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist gegen den C-terminalen Bereich (aa 220-479) von humanem ME2 entworfen. Dieser Bereich unterscheidet sich vom N-terminalen Transitpeptid, sodass erwartet wird, dass der Antikörper die reife mitochondriale Form erkennt.
• Da es sich um einen polyklonalen Antikörper handelt, kann er mehrere Isoformen erkennen, die durch alternatives Spleißen entstehen. Beim Western Blot wird die Hauptbande bei ca. 65 kDa erwartet, aber je nach Probe und Bedingungen können zusätzliche Banden auftreten.
• Für den WB kann die Verwendung von mitochondrial angereicherten Lysaten oder Geweben mit hohem mitochondrialen Gehalt (z. B. Leber, Herz) die Detektionsempfindlichkeit verbessern. Optimieren Sie Blockier- und Waschschritte, um den Hintergrund zu reduzieren.
• Im ELISA kann der Antikörper für den direkten oder indirekten Nachweis verwendet werden. Validieren Sie mit rekombinantem ME2-Protein oder Zelllysaten, um die Spezifität zu bestätigen und die optimale Verdünnung zu ermitteln.
• Die Kreuzreaktivität ist für humanes ME2 angegeben. Für andere Arten überprüfen Sie bitte vor der Verwendung die Sequenzhomologie im Immunogenbereich, da eine Reaktivität nicht garantiert ist.

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