Anti-MDM2-Kaninchen-polyklonaler Antikörper für WB und ELISA - Q00987

Zentrale Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von MDM2

• MDM2 ist eine E3-Ubiquitin-Protein-Ligase, die die Ubiquitinierung von p53/TP53 vermittelt und dadurch dessen proteasomalen Abbau bewirkt. Durch direkte Bindung an deren transaktivierende Domänen hemmt MDM2 den p53- und p73-vermittelten Zellzyklusarrest und die Apoptose. Zugehörige Referenzen: PMID:29681526
• MDM2 fungiert außerdem als E3-Ubiquitin-Ligase gegenüber sich selbst und ARRB1, ermöglicht den nukleären Export von p53, fördert den ubiquitinunabhängigen Abbau von RB1 und hemmt die DAXX-vermittelte Apoptose durch Ubiquitinierung und Abbau.
• MDM2 ubiquitiniert IGF1R und SNAI1 und markiert sie dadurch für den proteasomabhängigen Abbau. Zugehörige Referenzen: PMID:12821780 PMID:15053880 PMID:15195100
• MDM2 reguliert die mitochondriale Atmung negativ, indem es an NDUFS1 bindet, dessen zytosolische Retention verursacht, die Aktivität von Komplex I reduziert, die ROS-Produktion erhöht und die Apoptose einleitet. Zugehörige Referenzen: PMID:30879903
• Das Protein befindet sich im Zellkern (Nukleoplasma und Nukleolus) sowie im Zytoplasma, was mit seinen Funktionen bei der Transkriptionsregulation und der zytoplasmatischen Signalübertragung übereinstimmt.
• MDM2 wird ubiquitär exprimiert, jedoch werden mehrere krebsassoziierte Isoformen (Mdm2-A bis Mdm2-G) in Tumoren nachgewiesen und fehlen in normalen Geweben.
• MDM2 wird als Protoonkogen klassifiziert, ist ein Phosphoprotein mit einer Zinkfingerdomäne vom RING-Typ und ist an Interaktionen zwischen Wirt und Virus sowie am Ubiquitin-Konjugationsweg beteiligt.

Experimentelle Hinweise und technische Tipps

• Das Immunogen umfasst die Aminosäuren 200–430 des humanen MDM2 und deckt die saure Domäne, die Zinkfinger- und die RING-Finger-Regionen ab, die bei Mensch, Maus und Ratte konserviert sind. Für Western Blotting sollten Lysate aus MDM2-überexprimierenden Krebszelllinien (z. B. SJSA-1) als Positivkontrollen verwendet werden. Die Detektion in Maus- und Rattengewebe sollte mit geeigneten artspezifischen Sekundärantikörpern validiert werden.
• Im WB wird eine primäre Bande bei etwa 55 kDa erwartet; Spezies mit höherem Molekulargewicht können posttranslational modifizierte Formen von MDM2 darstellen (z. B. ubiquitiniertes oder phosphoryliertes MDM2). Die Zugabe von Phosphataseinhibitoren während der Probenvorbereitung kann dazu beitragen, das erwartete Molekulargewicht zu erhalten.
• Für ELISA sollte der Antikörper sowohl in Formaten mit direkter Antigenbeschichtung als auch in Sandwich-Formaten getestet werden. Zur Optimierung der Arbeitskonzentrationen von Beschichtungsantigen und Antikörper werden vorläufige Schachbrett-Titrationen empfohlen.

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