Anti-MDC1 Kaninchen-Polyklonaler Antikörper für WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - Q14676

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung von MDC1

• MDC1 (Mediator of DNA damage checkpoint protein 1), auch bekannt als NFBD1 (Nuclear factor with BRCT domains 1), fungiert als Histonleser, das spezifisch phosphoryliertes Histon H2AX (γH2AX) an Stellen von DNA-Doppelstrangbrüchen bindet und als molekulare Gerüststruktur für DNA-Reparatur- und Signaltransduktionsproteine dient. Verwandte Referenzen: PMID:12475977 PMID:12499369 PMID:12551934
• Nach einem DNA-Schaden erleichtert MDC1 die Rekrutierung und Retention von DNA-Reparaturfaktoren, einschließlich des MRN-Komplexes (über NBN) und TOPBP1, an Schadensfoki; es ist essenziell für die anschließende Phosphorylierung und Aktivierung der Checkpoint-Kinasen ATM, CHEK1 und CHEK2, was zu einem Zellzyklusarrest und der Stabilisierung von p53 führt. Verwandte Referenzen: PMID:12607004 PMID:12607005 PMID:15201865 PMID:16049003
• MDC1 trägt zur chromosomalen Stabilität während der Mitose bei, indem es die Bildung von TOPBP1-Filamenten fördert, die gebrochene Chromosomen verankern. Es ist für die homologe Rekombinationsreparatur erforderlich, da es die Rekrutierung von NBN an DSBs ermöglicht. Verwandte Referenzen: PMID:18411307 PMID:18582474 PMID:18583988 PMID:30898438
• Das Protein lokalisiert hauptsächlich im Zellkern und assoziiert mit Chromatin, insbesondere an schadensinduzierten Foci. Es ist im Hoden stark exprimiert, was auf eine Rolle bei Prozessen der Meiose oder Keimzellen hindeutet.
• MDC1 ist ein großes Phosphoprotein (~227 kDa), das multiple posttranslationale Modifikationen durchläuft – darunter Acetylierung, Methylierung und Ubiquitinierung – die seine Interaktion mit der DNA-Reparaturmaschinerie regulieren.
• Alternatives Spleißen erzeugt mehrere Isoformen, und das Protein enthält tandem BRCT-Domänen, die seine Bindung an phosphorylierte Proteine an Schadensstellen vermitteln.

Experimentelle Anleitung und Technische Tipps

• Das Immunogen entspricht der N-terminalen Region (Aa 1-350) des menschlichen MDC1; diese Region liegt außerhalb der BRCT-Domänen, und der Antikörper kann volllängige und N-terminale Fragmente erkennen.
• Für Western Blot (WB) empfehlen sich aufgrund des hohen Molekulargewichts (~227 kDa) SDS-PAGE-Gele mit niedrigem Prozentanteil (z. B. 6-8 % Trenngel) und ausreichende Transferzeit.
• Für Immunhistochemie (IHC-P) und Immunfluoreszenz (IF/ICC) validieren Sie das Färbemuster in bekannten positiven Geweben (z. B. Hoden) oder DNA-schadensinduzierten Zellmodellen.
• Der Antikörper wurde für ELISA getestet, aber die optimale Arbeitsverdünnung muss empirisch durch den Endanwender bestimmt werden.

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