Anti-MDA5 polyklonaler Kaninchen-Antikörper für WB, ELISA - Q9BYX4

Wichtige Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: MDA5-Funktion und Lokalisierung

• MDA5 (IFIH1), auch bekannt als Helicard, RLR-2 oder Melanom-Differenzierungs-assoziiertes Protein 5, ist ein Mitglied der RIG-I-like Rezeptor (RLR)-Familie zytoplasmatischer DExD/H-Box-RNA-Helikasen.
• Es dient als angeborener Immun-Sensor für virale Nukleinsäuren und spielt eine wesentliche Rolle bei der Initiierung antiviraler Reaktionen, einschließlich der Induktion von Typ-I-Interferonen und proinflammatorischen Zytokinen (PubMed:28594402, PubMed:32169843, PubMed:33727702). Zugehörige Referenzen: PMID:28594402 PMID:32169843 PMID:33727702
• MDA5 erkennt lange doppelsträngige RNA (>1 kb Länge) sowie mRNA, der eine 2'-O-Methylierung an ihrer 5'-Kappe fehlt, als pathogenassoziierte molekulare Muster (PubMed:22160685). Zugehörige Referenzen: PMID:22160685
• Nach Bindung des Liganden assoziiert MDA5 mit dem mitochondrialen antiviralen Signalprotein MAVS, was die Aktivierung der TBK1/IKBKE-Kinase und die Phosphorylierung von IRF3/IRF7 auslöst, um die Transkription von Interferon-Genen voranzutreiben.
• Dieser Rezeptor erkennt ein breites Spektrum an Viren, darunter Picornaviren wie EMCV und Rhinovirus, Flaviviren wie Dengue- und West-Nil-Virus, Reoviren, Vaccinia-Virus und das Coronavirus SARS-CoV-2 (PubMed:28606988, PubMed:33440148, PubMed:33514628). Zugehörige Referenzen: PMID:28606988 PMID:33440148 PMID:33514628
• Subzellulär findet sich MDA5 im Zytoplasma, im Zellkern und in den Mitochondrien.
• Es ist weit verbreitet, jedoch in geringen Mengen exprimiert, mit relativ höherer Abundanz in Plazenta, Pankreas und Milz, während es in Gehirn, Hoden und Lunge kaum nachweisbar ist.
• MDA5 ist ein Phosphoprotein und enthält CARD-Domänen, eine ATP-abhängige DExD/H-Box-Helikase-Domäne sowie eine C-terminale Domäne; es unterliegt einer regulatorischen Ubiquitinierung.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das zur Generierung dieses Antikörpers verwendete Immunogen umfasst die Aminosäuren 277–490 des humanen IFIH1; es kann sowohl das Volllängenprotein (~117 kDa) als auch potenzielle kürzere Isoformen oder Spaltprodukte erkennen.
• Für Western Blotting sollten Lysate von Interferon-stimulierten oder virusinfizierten humanen Zellen in Betracht gezogen werden, um die MDA5-Expression hochzuregulieren. Verwenden Sie geeignete Positiv- und Negativkontrollen und überprüfen Sie die Bandengrößen im Verhältnis zu den vorhergesagten Molekulargewichten.
• Optimieren Sie bei der Durchführung eines ELISA die Beschichtungs- und Nachweisbedingungen unter Verwendung des Antikörpers in Kombination mit geeigneten rekombinanten oder nativen MDA5-Standards; eine Kreuzreaktivität mit anderen Mitgliedern der RLR-Familie sollte bewertet werden.
• Wie bei jedem polyklonalen Antikörper kann die Chargenvariabilität die Leistung beeinflussen; wir empfehlen, jede neue Charge in Ihrem spezifischen Testsystem zu titrieren und zu validieren.

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