Anti-MAD2/MAD2L1 polyklonaler Kaninchen-Antikörper für WB, ELISA - Q13257

Kernspezifikationen und Parameter des Produkts

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung des Mitotic Spindle Assembly Checkpoint-Proteins MAD2A

• MAD2L1 (MAD2A) ist eine entscheidende Komponente des mitotischen Checkpoint-Komplexes (MCC), der den Anaphase-Promoting Complex/Cyclosome (APC/C) hemmt, um die Chromosomensegregation zu verzögern, bis alle Chromosomen korrekt an die mitotische Spindel angeheftet sind.
  Zugehörige Referenzen:
  PMID:10700282
  PMID:11804586
  PMID:15024386
• Der MCC besteht aus CDC20, MAD2L1, BUB1B/BUBR1 und BUB3; seine Bindung an APC/C hält den Komplex in einem inaktiven Zustand und verhindert den vorzeitigen Beginn der Anaphase.
  Zugehörige Referenzen:
  PMID:15020684
  PMID:27509861
• Nach dem Stilllegen des Spindel-Assembly-Checkpoints rekrutiert der MCC-APC/C-Komplex das E2-Enzym UBCH10, was zur Auto-Ubiquitinierung und zum Abbau von CDC20 führt. Dies reaktiviert APC/C und treibt den Übergang von der Metaphase zur Anaphase voran.
  Zugehörige Referenzen:
  PMID:27509861
• MAD2L1 nimmt zwei unterschiedliche Konformationen an: offen (O-MAD2) und geschlossen (C-MAD2). Die geschlossene Form lagert sich an nicht angehefteten Kinetochoren mit MAD1L1 zusammen, um eine Vorlage zu schaffen, die die Umwandlung von O-MAD2 in C-MAD2 katalysiert und so das Checkpoint-Signal verstärkt.
  Zugehörige Referenzen:
  PMID:29162720
• Alternatives Spleißen erzeugt zwei Isoformen (MAD2A und MAD2B); MAD2A (kodiert durch MAD2L1) ist die mitotisch regulierte Isoform, die für die Funktion des Spindel-Checkpoints essentiell ist.
• Das Protein lokalisiert sich während des gesamten Zellzyklus dynamisch: Es befindet sich während der Interphase im Zytoplasma und im Zellkern, konzentriert sich während der Mitose an Kinetochoren und Spindelpolen und verlagert sich bei Aktivierung des Checkpoints.
• Posttranslationale Modifikationen, einschließlich Acetylierung und Phosphorylierung, feinjustieren die Aktivität und Interaktionen von MAD2L1. Sein von UniProt berechnetes Molekulargewicht beträgt ~23,5 kDa, während Produktdaten auf ~24 kDa hinweisen.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen (AS 1-205) umfasst die N-terminale Region, die für die MAD1-Interaktion und den Konformationswechsel entscheidend ist. Dieses Design kann den Nachweis sowohl der O-MAD2- als auch der C-MAD2-Formen ermöglichen.
• Erwarten Sie beim Western Blot eine Bande in der Nähe von 24 kDa. Verwenden Sie mitotisch synchronisierte Zellen (z. B. mit Nocodazol behandelt) zusammen mit Interphase-Kontrollen, um die Spezifität zu bestätigen.
• ELISA-Anwendungen können direkte oder Sandwich-Formate nutzen; erwägen Sie die Verwendung von rekombinantem MAD2L1-Protein als Standard.
• Aufgrund der Sequenzkonservierung wird eine Kreuzreaktivität des Antikörpers mit MAD2L1 von Maus und Ratte vorhergesagt; eine Validierung in entsprechenden Gewebe- oder Zelllysaten wird empfohlen.
• Für funktionelle Studien kombinieren Sie dies mit Zell-Synchronisationsprotokollen, um mitotische Populationen anzureichern und den Signalnachweis zu verbessern.

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