Anti-MAD2/MAD2L1 Polyklonaler Antikörper für IHC-P, IF/ICC, ELISA - Q13257

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: MAD2/MAD2L1 Funktion und Lokalisierung

• MAD2L1 kodiert das mitotische Spindelassembly-Kontrollpunktprotein MAD2A (auch bekannt als MAD2-ähnliches Protein 1), einen kritischen Regulator der Genauigkeit der Chromosomensegregation.
• MAD2L1 ist eine Kernkomponente des mitotischen Kontrollpunktkomplexes (MCC), der das Anaphase-promoting Complex/Cyclosome (APC/C) hemmt, um die Chromosomensegregation zu verzögern, bis alle Chromosomen korrekt an der mitotischen Spindel befestigt sind. Verwandte Referenzen: PMID:10700282 PMID:11804586 PMID:15024386
• Der MCC, bestehend aus CDC20, MAD2L1/MAD2, BUB1B/BUBR1 und BUB3, dient als der Haupteffektor des Spindelassembly-Kontrollpunkts. Verwandte Referenzen: PMID:15020684 PMID:27509861
• Das MCC-gebundene APC/C bleibt inaktiv und verhindert den Übergang von der Metaphase zur Anaphase; das Ausschalten des Kontrollpunkts löst die UBCH10-vermittelte Auto-Ubiquitinierung von CDC20 aus, was zur Reaktivierung des APC/C führt. Verwandte Referenzen: PMID:27509861
• MAD2L1 unterliegt einem dynamischen konformationellen Schalter: Die geschlossene Konformation (C-MAD2) bildet einen Komplex mit MAD1L1 an nicht befestigten Kinetochoren, rekrutiert offenes MAD2 (O-MAD2) und katalysiert seine Umwandlung in C-MAD2, wodurch die Kontrollpunktsignalverstärkung verstärkt wird. Verwandte Referenzen: PMID:29162720
• Subzellulär lokalisiert sich MAD2L1 im Kern, an den Kinetochoren der Zentromeren, an den Spindelpolen und im Zytoplasma, was seine vielseitigen mitotischen Funktionen widerspiegelt.
• Das Protein unterliegt Acetylierung und Phosphorylierung, und alternatives Spleißen erzeugt mehrere Isoformen; Diese Modifikationen und Varianten können die Kontrollpunktaktivität und Proteinwechselwirkungen modulieren.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen entspricht den N-terminalen 205 Aminosäuren von humanem MAD2L1; Erwägen Sie die Überprüfung der Isoform- und Spezifität in Ihrem spezifischen Assay-System, da Kreuzreaktionen mit eng verwandten Proteinen auftreten können.
• Für die Immunhistochemie (IHC-P) können Antigen-Retrieval-Methoden und Fixierungsbedingungen die Färbung beeinflussen; Eine Optimierung wird unter Verwendung geeigneter positiver (z. B. mitotischer Gewebe) und negativer Kontrollen empfohlen.
• Bei der Immunfluoreszenz (IF/ICC) ist eine Markierung der Kinetochoren und Spindelpole während der Mitose zu erwarten; Eine Co-Färbung mit Zentromer- oder Tubulin-Markern kann zur Bestätigung der Zielbindung helfen.
• Für ELISA kann gereinigtes rekombinantes MAD2L1-Protein als positive Kontrolle dienen; Eine Titration von Antikörper- und Antigenkonzentrationen wird empfohlen, um ein optimales Signal-Rausch-Verhältnis zu ermitteln.
• Validieren Sie den Antikörper immer in Ihren spezifischen Proben und im Anwendungskontext, da die Leistung über Zelltypen und experimentelle Bedingungen hinweg variieren kann.

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