Anti-LSD2/KDM1B/AOF1 Kaninchen monoklonaler Antikörper für WB, ELISA - Q8NB78

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung von LSD2/KDM1B/AOF1

• LSD2/KDM1B/AOF1 ist eine lysinspezifische Histondemethylase, die spezifisch Mono- und Dimethylgruppen von Lysin 4 des Histons H3 (H3K4me1/2) entfernt und damit als transkriptioneller Corepressor wirkt.
• Sie zeigt keine Aktivität gegenüber trimethyliertem H3K4 oder methyliertem H3K9, H3K27, H3K36 oder H4K20, was eine hohe Substratspezifität demonstriert.
• Das Enzym ist für die de novo-DNA-Methylierung einer Teilmenge geprägter Gene während der Oogenese erforderlich, was es mit der entwicklungsbedingten epigenetischen Programmierung verknüpft.
• Die Katalyse verläuft über eine FAD-abhängige Oxidation des Substrats, wobei ein Imin-Zwanderprodukt gebildet wird, das anschließend hydrolysiert wird.
• Allein hat LSD2 eine minimale Aktivität auf Nukleosomen-Substraten; die Assoziation mit GLYR1 bildet einen Komplex, der H3K4me auf Nukleosomen effizient demethyliert und so die Pol-II-Transkription durch Chromatin erleichtert. Verwandte Referenzen:
  PMID:30970244
• Subzellulär lokalisiert sich das Protein im Zellkern und ist mit Chromosomen assoziiert, was konsistent mit seiner Rolle bei der Chromatinmodifikation ist.
• Das Protein verfügt über Zinkfingerdomänen und FAD-Bindungsmotive, was es als Chromatinregulator und Flavoprotein klassifiziert.
• Posttranslationale Modifikationen umfassen Phosphorylierung, und es existieren mehrere Isoformen durch alternatives Spleißen.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen zielt auf die N-terminale Region (aa 1-100) ab; daher können Isoformen, die diese Region vermissen oder N-terminale Trunkierungen aufweisen, möglicherweise nicht erkannt werden. Überprüfen Sie dies in relevanten Systemen.
• Für Western Blots werden Kernextrakte empfohlen, um dieses chromatingebundene Protein anzureichern. Optimieren Sie die Antikörperverdünnung mit einer Positivkontrolle, wie z. B. HeLa- oder HEK-293-Zelllysaten.
• Das erwartete Molekulargewicht beträgt ~92 kDa. Bestätigen Sie die Bandenidentität mit geeigneten Molekulargewichtsmarkern und erwägen Sie die Verwendung von Blockierungsmitteln, die für Phosphoproteine optimiert sind, wenn Sie phosphorylierte Formen untersuchen.
• Eine Kreuzreaktivität wurde mit humanen, murinen und rattigen Proben beobachtet. Bei Verwendung von Proben anderer Arten führen Sie zunächst Validierungsexperimente durch.
• Für ELISA-Anwendungen titrieren Sie die Antikörperkonzentration und bestätigen Sie die Spezifität mittels rekombinanten Proteinen oder Peptid-Blockierungsassays.

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