Anti-LRRK2 Kaninchen-Monoklonalantikörper für WB, ELISA - Q5S007

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: LRRK2-Funktion und -Lokalisierung

• LRRK2 (Leucine-rich repeat serine/threonine-protein kinase 2), auch bekannt als Dardarin oder PARK8, ist ein großes Multidomänenprotein, das sowohl Serin/Threonin-Kinase- als auch GTPase-Aktivitäten besitzt; die GTPase-Funktion über die Roc-Domäne reguliert seine Kinase-Aktivität. Verwandte Referenzen: PMID:18230735, PMID:26824392, PMID:28720718
• Diese Kinase phosphoryliert eine breite Palette von Substraten, die an kritischen zellulären Prozessen beteiligt sind, einschließlich neuronaler Plastizität, angeborener Immunität, Autophagie und Vesikeltransport. Verwandte Referenzen: PMID:17114044, PMID:20949042, PMID:21850687
• LRRK2 ist ein Master-Regulator von RAB-GTPasen; es phosphoryliert mehrere Mitglieder der RAB-Familie (RAB3, RAB5, RAB8, RAB10, RAB12, RAB29, RAB35, RAB43) und steuert so deren GDP/GTP-Austausch und Wechselwirkungen mit Effektoren. Verwandte Referenzen: PMID:23395371, PMID:26824392, PMID:28720718
• LRRK2 reguliert die Autophagie positiv über einen kalziumabhängigen Mechanismus, der den CaMKK/AMPK-Signalweg aktiviert, was die Freisetzung von lysosomalem Kalzium beinhaltet. Verwandte Referenzen: PMID:22012985
• In Neuronen moduliert LRRK2 die Morphologie von Fortsätzen, den Transport synaptischer Vesikel und die primäre Ziliogenese; es phosphoryliert RAB8A und RAB10, um die Sonic-Hedgehog-(SHH)-Signalgebung im Gehirn zu fördern. Verwandte Referenzen: PMID:17114044, PMID:24687852, PMID:29125462, PMID:30398148
• Mutationen im LRRK2-Gen sind die häufigste genetische Ursache für familiäre Parkinson-Krankheit (PARK8) und tragen auch zu sporadischen Fällen bei.
• Subzellulär lokalisiert sich LRRK2 in zahlreichen Membrankompartimenten, einschließlich des Golgi-Apparats, des endoplasmatischen Retikulums, Endosomen, Lysosomen, Mitochondrien und synaptischer Vesikel; es findet sich auch im Zytosol und ist assoziiert mit dem Zytoskelett.
• LRRK2 ist weit verbreitet exprimiert, mit hohen Spiegeln in Gehirn, Herz und Leber; im Zentralnervensystem ist es prominent in dopaminergen Arealen und kortikalen Pyramidenneuronen zu finden.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen umfasst die Aminosäuren 100–340 von humanem LRRK2, einen N-terminalen Bereich; berücksichtigen Sie bei der Entwicklung von Nachweisassays die Epitop-Zugänglichkeit unter nativen gegenüber denaturierenden Bedingungen.
• Für Western Blots verwenden Sie SDS-PAGE-Gele mit niedrigem Prozentsatz und verlängerte Transferzeiten, die für hochmolekulare Proteine (~286 kDa) geeignet sind.
• Validieren Sie bei ELISA-Anwendungen den Nachweis unter Verwendung von rekombinantem LRRK2-Protein oder Lysaten aus Zelllinien, die das Ziel endogen exprimieren.
• Die Kreuzreaktivität ist für den Menschen bestätigt; für andere Spezies bewerten Sie die Sequenzhomologie der Immunogenregion und führen Sie einen Pilotversuch durch.

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