Anti-LRRK2-polyklonaler Antikörper für WB, IHC-P, ELISA – Q5S007

Zentrale Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von LRRK2

• LRRK2 (Leucin-reiche Repeat-Serin/Threonin-Proteinkinase 2), auch als Dardarin bekannt, ist ein großes multidomäniges Protein, das eine Kinasedomäne, eine Roc-GTPase-Domäne, eine COR-Domäne und WD40-Repeats enthält. Es weist sowohl Serin/Threonin-Kinase- als auch GTPase-Aktivität auf. Zugehörige Referenzen: PMID:18230735
• LRRK2 phosphoryliert ein breites Spektrum an Proteinen, darunter RAB-GTPasen (RAB3A/B/C/D, RAB5A/B/C, RAB8A/B, RAB10, RAB12, RAB29, RAB35, RAB43), PRDX3, APP und RIPK2, und reguliert dadurch neuronale Plastizität, Autophagie, die angeborene Immunität und den Vesikeltransport. Zugehörige Referenzen: PMID:23395371, PMID:26824392, PMID:28720718, PMID:21850687, PMID:27830463
• Es fungiert als wichtiger Regulator der primären Ziliogenese, indem es RAB8A und RAB10 phosphoryliert und dadurch die Sonic-Hedgehog-(SHH)-Signalübertragung im Gehirn fördert. Zugehörige Referenzen: PMID:29125462, PMID:30398148
• LRRK2 reguliert die Autophagie positiv durch eine kalziumabhängige Aktivierung des CaMKK/AMPK-Signalwegs, an der die Freisetzung von lysosomalem Kalzium beteiligt ist. Zugehörige Referenz: PMID:22012985
• Mutationen in LRRK2 stehen mit familiärer und sporadischer Parkinson-Krankheit in Zusammenhang und machen LRRK2 zu einem wichtigen Ziel der Neurodegenerationsforschung.
• Auf subzellulärer Ebene lokalisiert LRRK2 an zytoplasmatischen Vesikeln, am Golgi-Apparat, an Endosomen, Lysosomen, Mitochondrien, synaptischen Vesikeln, Phagosomen und am Zytoskelett; außerdem kommt es in neuronalen Zellkörpern, Axonen und Dendriten vor.
• Gewebespezifität: Im Gehirn stark exprimiert, insbesondere in Pyramidenneuronen des visuellen Kortex, der Substantia nigra pars compacta und des Nucleus caudatus/Putamens; außerdem auf Proteinebene in Herz, Leber, Plazenta, Lunge, Skelettmuskel, Niere und Pankreas exprimiert. Zugehörige Referenz: PMID:29127255
• LRRK2 ist am retrograden Transportweg von Lysosomen zum Golgi-Apparat beteiligt und interagiert mit RAB29 sowie dem Retromer-Komplex, um Proteine wie M6PR zu recyceln. Zugehörige Referenz: PMID:23395371
• Nach der Rekrutierung durch RAB29 zu überlasteten Lysosomen phosphoryliert und stabilisiert LRRK2 RAB8A und RAB10, fördert die Freisetzung lysosomaler Inhalte und reguliert über EHBP1 und EHBP1L1 die lysosomale Morphologie. Zugehörige Referenzen: PMID:30209220, PMID:38227290

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Für Western Blotting sollte aufgrund des hohen Molekulargewichts von LRRK2 (~286 kDa) ein 6–8%iges SDS-PAGE-Gel und eine verlängerte Transferzeit in Betracht gezogen werden.
• Validieren Sie die Antikörperspezifität anhand von Lysaten oder Geweben aus LRRK2-Knockout- oder LRRK2-Knockdown-Zellen, insbesondere in Modellen mit Gehirn- oder Immunzellen.
• Optimieren Sie für IHC-P die Antigen-Retrieval-Bedingungen und die Antikörperverdünnung anhand von humanen oder Nagetier-Gehirnschnitten, von denen bekannt ist, dass sie LRRK2 exprimieren, beispielsweise aus Substantia nigra oder Kortex.
• Verwenden Sie beim ELISA rekombinante LRRK2-Fragmente oder Zelllysate als Einfangantigene und ziehen Sie eine Blockierung mit BSA oder Casein in Betracht, um den Hintergrund zu reduzieren.
• Da es sich um einen polyklonalen Antikörper handelt, sollte eine mögliche Variabilität zwischen den Chargen berücksichtigt werden; validieren Sie jede neue Charge auf Konsistenz in Ihrer Anwendung.

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