Anti-LMAN1 polyklonaler Kaninchen-Antikörper für WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P49257

Kernspezifikationen und Parameter des Produkts

Biologischer Hintergrund: LMAN1-Funktion und Lokalisierung

• Das durch das LMAN1-Gen kodierte Protein ERGIC-53 (auch bekannt als gp58, MR60 oder Lektin-Mannose-bindend 1) ist ein 510 Aminosäuren langes Transmembranprotein mit einem vorhergesagten Molekulargewicht von ~57,5 kDa und einer beobachteten Bande bei etwa 54 kDa.
• Es fungiert als Mannose-spezifisches Lektin, das wahrscheinlich Zuckerreste an Glykoproteinen, Glykolipiden oder GPI-Ankern erkennt und an der Proteinsortierung und dem Recycling innerhalb des frühen sekretorischen Signalwegs beteiligt ist.
• Bildet einen spezifischen ER-zu-Golgi-Frachtrezeptorkomplex mit MCFD2, der den Vorwärtstransport ausgewählter Glykoproteine (z. B. Gerinnungsfaktoren V und VIII) vom endoplasmatischen Retikulum zum Golgi-Apparat vermittelt.
• Ubiquitär in menschlichen Geweben exprimiert, was mit seiner grundlegenden Rolle beim intrazellulären Transport übereinstimmt.
• Subzelluläre Lokalisierung: zirkuliert zwischen dem ER-Golgi-Intermediärkompartiment (ERGIC), dem Golgi-Apparat und den Membranen des endoplasmatischen Retikulums.
• Zu den posttranslationalen Modifikationen gehören Phosphorylierung und Disulfidbrückenbildung; enthält eine einzelne Transmembranhelix und benötigt Metallbindung für die korrekte Lektinfunktion.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen war ein rekombinantes Fragment, das die Aminosäuren 270–480 des humanen LMAN1 (NP_005561.1) umspannt und einen großen Teil der luminalen Domäne des Proteins darstellt; diese Region kann konformationelle Epitope aufweisen, die für den Nachweis von endogenem LMAN1 günstig sind.
• Für Western Blot (WB) wird eine Bande bei etwa 54 kDa in Lysaten von menschlichen, Maus- oder Rattenzellen erwartet; optimieren Sie die Beladung und Antikörperverdünnung unter Verwendung von Positivkontrollen (z. B. HeLa- oder Lebergewebe), von denen bekannt ist, dass sie ERGIC-53 exprimieren.
• Bei der Immunhistochemie (IHC-P) sollte eine Antigen-Demaskierung mit Citratpuffer (pH 6,0) in Betracht gezogen und an formalinfixierten, in Paraffin eingebetteten Schnitten von Geweben wie Leber, Pankreas oder Dickdarm getestet werden, in denen LMAN1 reichlich vorhanden ist.
• Für die Immunfluoreszenz (IF/ICC) ist ein Permeabilisierungsschritt erforderlich, um das Protein in ERGIC/ER/Golgi-Membranen nachzuweisen; eine Co-Färbung mit Organellenmarkern (z. B. GM130 für cis-Golgi) kann das charakteristische perinukleäre retikuläre Muster bestätigen.
• Bei ELISA-Anwendungen kann die polyklonale Natur dieses Antikörpers eine breite Epitopabdeckung bieten, jedoch müssen die Verdünnungs- und Blockierungsbedingungen empirisch für das spezifische Assay-Format optimiert werden.

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