Anti-KPNA4-Polyklonaler Antikörper für WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - O00629

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: KPNA4-Funktion und -Lokalisierung

• KPNA4 kodiert die Importin-Untereinheit alpha-3 (auch bekannt als Importin alpha Q1, Qip1 oder Karyopherin-Untereinheit alpha-4), ein 58 kDa Adapterprotein, das für den klassischen Kernimport entscheidend ist. Verwandte Referenzen: PMID:20818336
• Es funktioniert durch die Bindung von Substraten, die entweder einfache oder bipartite Kernlokalisierungssignale (NLS) enthalten, und deren Verknüpfung mit Importin beta (KPNB1) für den Transport durch den Kernporenkomplex (NPC). Verwandte Referenzen: PMID:20818336, PMID:28760339, PMID:29042532
• Der Importin-Substrat-Komplex dockt über KPNB1–Nukleoporin-Interaktionen am NPC an und transloziert in einem Ran-GTP-abhängigen, energieerfordernden Prozess; die Richtungsgebung wird durch die asymmetrische Verteilung von Ran-GTP und Ran-GDP erreicht. Verwandte Referenzen: PMID:20818336, PMID:28760339, PMID:29042532
• KPNA4 vermittelt den Kernimport verschiedener Fracht, einschließlich AARS1, MRTFA und RANBP3, und erleichtert auch den Kern Eintritt von viralen Proteinen wie dem humanen Zytomegalievirus UL84 durch die Erkennung nicht-klassischer NLS. Verwandte Referenzen: PMID:10567565, PMID:20818336, PMID:28760339
• Subzellulär lokalisiert sich KPNA4 sowohl im Zytoplasma als auch im Kern, was seiner Rolle beim Shuttle von Fracht in den Kern entspricht.
• Das Protein ist hochexprimiert in Hoden, Eierstöcken, Dünndarm, Herz, Skelettmuskel, Lunge und Bauchspeicheldrüse, mit niedriger Expression in Niere, Thymus, Dickdarm und peripheren Blutzellen.
• Posttranslationale Modifikationen umfassen Acetylierung und Phosphorylierung; das Protein enthält Armadillo-Repeat-Domänen, die für die NLS-Bindung essentiell sind, und ist als Mitglied des Referenzproteoms klassifiziert, das am Proteintransport und Wirt-Virus-Interaktionen beteiligt ist.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen zielt auf die N-terminalen 1–240 Aminosäuren von humanem KPNA4 ab, was Spezifität für die Importin-alpha-Untereinheit gegenüber anderen Karyopherin-Familienmitgliedern verleihen kann; jedoch wird eine Validierung im relevanten Modellsystem empfohlen.
• Für Western Blotting wird eine Bande nahe 58 kDa unter reduzierenden Bedingungen erwartet; eine Titration der Antikörperkonzentration wird für ein optimales Signal-Rausch-Verhältnis empfohlen.
• In der Immunzytochemie und Immunfluoreszenz kann, da KPNA4 zwischen Zytoplasma und Kern shuttle, beide Kompartimente Färbung zeigen; die Kernakkumulation kann unter bestimmten Bedingungen prominenter sein.
• Für die Immunhistochemie an Paraffinschnitten können Antigen-Retrieval und Optimierung an Gewebe-Arrays, die Gewebe mit hoher und niedriger Expression enthalten (z. B. Hoden vs. Niere), helfen, die Spezifität zu bestätigen.
• Der Antikörper kreuzreagiert mit Maus und Ratte, was ihn für orthologe Studien geeignet macht; dennoch sollte die Kreuzreaktivität in jedem Lysat der Spezies verifiziert werden.
• Bei Verwendung für ELISA sollte berücksichtigt werden, dass polyklonale Antikörper eine breitere Epitopabdeckung bieten können, aber auch einen höheren Hintergrund aufweisen können; die Optimierung von Blockierungs- und Waschschritten ist kritisch.

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