Anti-KLKB1 polyklonaler Kaninchen-Antikörper für WB, IHC-P, ELISA - P03952

Wichtige Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: KLKB1-Funktion und Lokalisierung

• KLKB1 kodiert Plasma-Präkallikrein, das Zymogen von Plasmakallikrein, einer Serinprotease, die als inaktive Vorstufe im Blut zirkuliert.
• Nach der Aktivierung beteiligt sich Plasmakallikrein an der oberflächenabhängigen Aktivierung der Blutgerinnung, indem es nach Bindung an negativ geladene Oberflächen den Gerinnungsfaktor XII (FXII) reziprok aktiviert.
• Es setzt das vasoaktive Peptid Bradykinin aus hochmolekularem Kininogen (HMWK) frei und verknüpft so das Kontaktaktivierungssystem mit Entzündungsprozessen und vaskulärer Permeabilität.
• Plasmakallikrein kann auch zum Renin-Angiotensin-System beitragen, indem es Prorenin in aktives Renin umwandelt.
• Die subzelluläre Lokalisierung ist ausschließlich extrazellulär; das Protein wird in das Plasma sezerniert, wo es normalerweise vorkommt.
• Das Protein enthält ein Signalpeptid, mehrere Apple-Domänen für Protein-Protein-Interaktionen und eine Trypsin-ähnliche Serinprotease-Domäne; es ist N-glykosyliert und durch Disulfidbrücken stabilisiert.
• Genetische Varianten in KLKB1 werden mit Präkallikrein-Mangel (Fletcher-Faktor-Mangel) assoziiert, einer seltenen Erkrankung mit verlängerter aktivierter partieller Thromboplastinzeit, die jedoch typischerweise keine Blutungsneigung aufweist.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen erstreckt sich über die Aminosäuren 20–300 der schweren Kette, welche die vier Apple-Domänen enthält, die für die Bindung an HMWK und negativ geladene Oberflächen verantwortlich sind; diese Region ist zwischen Mensch, Maus und Ratte hochkonserviert, was die beobachtete Kreuzreaktivität unterstützt.
• Beim Western Blot kann eine Bande bei ca. 71 kDa (Präkallikrein) oder ca. 85 kDa (Vollversion mit Glykosylierung) nachgewiesen werden; eine Reduktion mit DTT/TCEP wird empfohlen, um Disulfid-verknüpfte Ketten aufzulösen.
• Bei der Immunhistochemie (IHC-P) sollte eine Antigen-Demaskierung mit Citratpuffer (pH 6,0) und ein für primäre Kaninchen-Antikörper empfindliches Detektionssystem in Betracht gezogen werden; Präimmunserum oder blockierende Peptidkontrollen werden empfohlen, um die Spezifität zu bestätigen.
• Für ELISA kann der Antikörper als Fänger- oder Detektionsreagenz verwendet werden; die Paarung mit einem monoklonalen Antikörper gegen ein anderes Epitop kann jedoch die Sensitivität und Spezifität verbessern.
• Da Plasmakallikrein im Blut reichlich vorhanden ist, kann eine Voradsorption des polyklonalen Antikörpers gegen immobilisierte Maus-/Ratten-Serumproteine den Hintergrund bei Anwendungen mit Nagetiergewebe reduzieren, falls unspezifische Bindungen auftreten.
• Validieren Sie die Leistung in Ihrem spezifischen Probentyp (Plasma, Serum, Gewebelysat) durch Einbeziehung von Positivkontrollen (z. B. gereinigtes Plasmakallikrein oder aktiviertes Plasma) und Negativkontrollen (KLKB1-depletiertes Plasma oder, falls verfügbar, Knockout-Zelllinien).

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