Anti-KIR2DL2/KIR2DL3 monoklonaler Antikörper für WB, IF/ICC, FC, ELISA - P43628

Kern-Produktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: KIR2DL2/KIR2DL3 Funktion und Lokalisierung

• KIR2DL3 (Killer Cell Immunoglobulin-like Receptor 2DL3, auch bekannt als CD158b, p58 NK-Rezeptor, NKAT2) ist ein Typ-I-Transmembran-Glykoprotein-Mitglied der KIR-Familie. Es fungiert als hemmender Rezeptor auf natürlichen Killerzellen (NK-Zellen) für spezifische HLA-C-Allotypen, einschließlich HLA-Cw1, Cw3 und Cw7.
• Der Rezeptor enthält zwei extrazelluläre Immunglobulin-ähnliche C2-Domänen, eine einzelne Transmembranhelix und einen cytoplasmatischen Schwanz mit Immunrezeptor-Tyrosin-basierten hemmenden Motiven (ITIMs), die Phosphatasen rekrutieren, um Aktivierungssignale zu blockieren.
• Die Expression von KIR2DL3 ist weitgehend auf NK-Zellen beschränkt, wo sie die Selbstduldung vermittelt und durch Überwachung der MHC-Klasse-I-Expression auf Zielzellen nach fehlendem Selbst sucht.
• Die Bindung von KIR2DL3 an seinen Liganden unterdrückt die NK-Zell-vermittelte Zytotoxizität, verhindert die Lyse gesunder Zellen und ermöglicht das Abtöten von Zellen, die HLA-C herunterreguliert haben.
• Die extrazelluläre Domäne unterliegt N-verknüpfter Glykosylierung und Disulfidbrückenbildung, was zu den beobachteten multiplen Molekulargewichtsformen (~27 kDa nicht glykosyliert und ~37–38 kDa glykosyliert) beiträgt.
• KIR2DL2, kodiert durch ein anderes Gen, teilt etwa 96 % Aminosäureidentität mit KIR2DL3 und zeigt eine ähnliche HLA-C-Spezifität; das Immunogen des Antikörpers (aa 22-245 von KIR2DL3) umspannt einen zwischen beiden Rezeptoren konservierten Bereich, was eine Kreuzdetektion ermöglicht.
• Alternatives Spleißen der KIR2DL3-Transkripte kann Varianten mit veränderter Ligandenbindung oder Signaleigenschaften erzeugen, obwohl die Volllängen-Isoform die vorherrschende funktionelle Form ist.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Für Western Blotting werden Banden um 27 kDa (nicht glykosyliert) und 37–38 kDa (glykosylierte Form) erwartet. Verwenden Sie reduzierende Bedingungen und laden Sie Gesamtlisate aus KIR-positiven NK-Zelllinien (z. B. NK92, YTS) als positive Kontrolle. Erwägen Sie eine Entglykosylierung mit PNGase F, um das Bandenmuster zu vereinfachen.
• Da das Immunogen die extrazelluläre Domäne abdeckt, erkennt der Antikörper den nativen Oberflächenrezeptor; für Durchflusszytometrie und Immunfluoreszenz ist keine Permeabilisierung für die Oberflächenfärbung erforderlich. Titrieren Sie den Antikörper und schließen Sie eine Isotyp-Kontrolle ein, um die Spezifität auf humanen PBMCs oder isolierten NK-Zellen sicherzustellen.
• Für ELISA-Anwendungen kann dieser monoklonale Antikörper als Capture- oder Detektionsreagenz dienen; wenn Sie einen Sandwich-Immunoassay aufbauen, kombinieren Sie ihn mit einem Binder an ein separates Epitop. Validieren Sie mit rekombinantem KIR2DL3-Protein oder Zelllysaten.
• Bestätigen Sie die Kreuzreaktivität mit KIR2DL2 durch Tests in Zelllinien, die jeden Rezeptor einzeln exprimieren (z. B. 293T-Transfektanten), angesichts der hohen Sequenzhomologie.
• Aufgrund des KIR-Polymorphismus können Färbemuster zwischen Spendern variieren; optimieren Sie die Antikörperkonzentration für jede Anwendung und jeden Zelltyp.

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