Anti-Ki67 Rabbit PolymAb® (KO Validiert) für WB, IF/ICC, IF-P, IHC-P, ELISA - E9PVX6

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: Ki67-Funktion und -Lokalisierung

• MKI67 (Ki-67) ist ein etablierter Proliferationsmarker, der im Kern aktiver teilender Zellen exprimiert wird, wobei die Expressionslevel eng mit dem Zellzyklus korrelieren.
• Es assoziiert sich während der frühen Mitose mit mitotischen Chromosomen und bildet eine charakteristische bürstenartige Struktur, die als sterische und elektrostatische Barriere wirkt, um ein Chromosomenclustering zu verhindern. Verwandte Referenzen: PMID:27362226
• Die hohe Nettoladung von Ki67 trägt zu seinen tensidähnigen Eigenschaften bei, dispersiert Chromosomen und erleichtert eine unabhängige Beweglichkeit. Verwandte Referenzen: PMID:27362226
• In der Anaphase wechselt Ki67 zu einem Chromosomen-Attraktor und fördert durch Dephosphorylierung und RNA-abhängige Flüssig-Flüssig-Phasentrennung das Chromosomenclustering.
• Es bindet DNA, insbesondere supercoiled und AT-reiche Sequenzen, und interagiert mit prä-maturen ribosomalen RNAs, um die chromosomale Organisation zu modulieren.
• Ki67 lokalisiert an die Chromosomenoberfläche, das Nukleolus und den Zellkern. Posttranslationale Modifikationen umfassen Acetylierung und Phosphorylierung.
• Das Protein hat ein vorhergesagtes Molekulargewicht von ~350 kDa, wobei alternatives Spleißen zu Varianten von 359 kDa führt.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches Peptid aus den Aminosäuren 2271–2370; ziehen Sie für die Validierung im WB die Einbeziehung sowohl positiver als auch negativer KO-Zelllysate in Betracht.
• Verwenden Sie für WB aufgrund der großen Proteingröße (~350 kDa) ein Gel mit niedrigem Prozentgehalt (z. B. 6–8 %) und verlängerte Transferzeiten.
• Bei IHC-P ist eine effektive Antigen-Retrieval für die nukleäre Ki67-Färbung erforderlich; Citratpuffer (pH 6,0) mit Hitze wird häufig verwendet.
• Für IF/ICC wird ein Permeabilisierungsschritt mit 0,1–0,5 % Triton X-100 empfohlen, um Zugang zu nukleären Antigenen zu erhalten.
• Dieser Antikörper ist für Knockout-Studien validiert; überprüfen Sie die Spezifität in Ihrem Modellsystem durch den Vergleich von Wildtyp- und KO-Proben.

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