Anti-KAP1/TRIM28 Polyklonaler Antikörper für WB, IP, IF/ICC, IHC-P, ELISA - Q13263

Kernproduktschreibweise und Parameter

Biologischer Hintergrund: KAP1/TRIM28 Funktion und Lokalisierung

• Auch bekannt als Transkriptionsvermittlerfaktor 1-beta (TIF1-beta), KRAB-assoziiertes Protein 1 (KAP-1) oder KRIP-1, ist dieses 88,6 kDa Tripartit-Motiv (TRIM) Familienprotein durch RING-, B-Box-, Coiled-Coil-, PHD- und Bromodomänenbereiche gekennzeichnet.
• Fungiert als E3-SUMO- und Ubiquitin-Ligase, die Transkriptionsrepressionskomplexe durch Rekrutierung von SETDB1 (Histon-Methyltransferase) und NuRD (Nukleosomen-Umbau und Deacetylierung)-Komplex gerüstet, was zur H3K9-Methylierung und Heterochromatinbildung führt.
• Dient als nuklearer Corepressor für KRAB-Domänen enthaltende Zinkfingerproteine (KRAB-ZFPs), vermittelt die Stummschaltung endogener Retroviren und Gene, die für die embryonale Entwicklung und den genomischen Imprinting kritisch sind.
• In regulatorischen T-Zellen kooperiert es mit ZFP90-Isoform 2, um die Transkriptionsrepressoraktivität von FOXP3 zu verstärken, was für die unterdrückende Funktion von Treg essentiell ist. Verwandte Referenzen: PMID:23543754
• Erhält einen transkriptiv repressiven Zustand in undifferenzierten embryonalen Stammzellen (ESCs) aufrecht und bewahrt die Pluripotenz und das frühe Entwicklungspotenzial. Verwandte Referenzen: PMID:24623306
• Wirkt als positiver Regulator der Typ-I-Interferon-Signalisierung (IFN-I), indem es die Lys-63-verknüpfte Ubiquitinierung von TBK1 vermittelt und die Bildung des TBK1-IRF3-Komplexes erleichtert. Verwandte Referenzen: PMID:38495890
• Reguliert die angeborene Immunität und Entzündung durch SUMOylierung wichtiger Mediatoren: Die TRAF6-SUMOylierung steuert den nukleo-zytoplasmatischen Transport und die NF-kappa-B-Aktivierung, während die NLRP3-SUMOylierung das Inflammasom stabilisiert und die Aktivierung verstärkt. Verwandte Referenzen: PMID:39920527, PMID:34373456
• Lokalisiert sich vorwiegend im Kern und ist breit über menschliche Gewebe exprimiert, einschließlich Milz, Thymus, Prostata, Hoden, Eierstock, Dünndarm, Dickdarm und peripheren Blutzellen.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen deckt den C-terminalen Bereich (aa 576-835) ab, der die PHD- und Bromodomäne enthält; der resultierende polyklonale Antikörper kann das全长-KAP1/TRIM28 sowie potenzielle Spleißvarianten oder posttranslational modifizierte Formen erkennen.
• Für das Western Blotting wird ein Band bei ca. 89 kDa (vorhergesagt 88,6 kDa) erwartet; erwägen Sie die Verwendung von 8–10% SDS-PAGE für eine optimale Auflösung und validieren Sie in Lysaten aus menschlichen, murinen oder Ratten-Zellen.
• Bei Immunpräzipitationsassays optimieren Sie die Antikörperkonzentration und die Bedingungen des Lysepuffers; das Vernetzen des Antikörpers an Perlen kann die Erfassung verbessern und die Störung durch schwere/leichte Ketten reduzieren.
• Für die Immunfluoreszenz/ICC ist eine Kernfärbung zu erwarten; verwenden Sie eine geeignete Fixierung (z. B. 4% PFA) und Permeabilisierung (z. B. 0,1% Triton X-100) und schließen Sie eine DAPI-K-Färbung ein.
• Bei der Durchführung von Immunhistochemie (IHC-P) ist eine Antigen-Retrieval in Citratpuffer (pH 6,0) oft vorteilhaft; fügen Sie immer positive und negative Gewebekontrollen hinzu, um die Spezifität zu bestätigen.
• Für ELISA-Anwendungen, gepaart mit einem Nachweisantikörper, bestimmen Sie die optimale Beschichtungsantigenkonzentration und Antikörperverdünnungen empirisch unter Verwendung bekannter positiver und negativer Proben.

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