Anti-Irf3-Kaninchen-polyklonaler Antikörper für WB, IHC-P, ELISA – P70671

Zentrale Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von Irf3

• Der Interferon-regulierende Faktor 3 (Irf3) ist ein zentraler Transkriptionsregulator der Typ-I-Interferon-(IFN)-abhängigen angeborenen Immunantworten und spielt eine entscheidende Rolle bei der antiviralen Abwehr gegen DNA- und RNA-Viren. Er reguliert die Transkription von Typ-I-IFN-Genen (IFN-alpha und IFN-beta) sowie von IFN-stimulierten Genen (ISG), indem er an Interferon-stimulierte Response-Elemente (ISRE) in deren Promotoren bindet. Dabei wirkt er als stärkerer Aktivator von IFNB als von IFNA. Zugehörige Referenzen:
  • PMID:15800576
  • PMID:39719712
• In nicht infizierten Zellen liegt Irf3 als inaktives zytoplasmatisches Monomer vor. Nach einer Virusinfektion, durch doppelsträngige RNA (dsRNA) oder eine Toll-like-Rezeptor-(TLR)-Signalübertragung wird es durch die Kinasen IKBKE und TBK1 phosphoryliert. Dies führt zu einer Konformationsänderung, die Dimerisierung, Translokation in den Zellkern und die Verbindung mit CREBBP zur Bildung des DRAF1-Komplexes bewirkt, welcher die Transkription von Typ-I-IFN- und ISG-Genen aktiviert. Irf3 kann außerdem in primären Makrophagen Apoptose induzieren. Zugehörige Referenzen:
  • PMID:16846591
  • PMID:16979567
  • PMID:20049431
• Alternatives Spleißen erzeugt mehrere Irf3-Isoformen; eine Isoform kann als Modulator wirken und die Transkriptionsaktivität der Isoform 1 verringern, indem sie um die ISRE-Bindung konkurriert.
• Die subzelluläre Lokalisation von Irf3 umfasst Zytoplasma, Zellkern und Mitochondrien und spiegelt dessen dynamisches Pendeln nach der Aktivierung wider.
• Zu den wichtigsten posttranslationalen Modifikationen gehören Phosphorylierung, Acetylierung und Ubiquitinierung (einschließlich Isopeptidbindung und Ubl-Konjugation), die seine Aktivität, Stabilität und Interaktionen regulieren.
• Irf3 wird in zahlreichen Geweben breit exprimiert, was mit seiner umfassenden Rolle in der angeborenen Immunität übereinstimmt.

Experimentelle Hinweise und technische Tipps

• Das Immunogen entspricht den Aminosäuren 100–200 von murinem Irf3; diese zentrale Region ist wahrscheinlich über verschiedene Spezies hinweg konserviert, was die beobachtete Kreuzreaktivität mit Mensch und Ratte unterstützt. Bei der Verwendung in anderen Spezies sollte ein Sequenzvergleich zur Überprüfung der Epitopkonservierung in Betracht gezogen werden.
• Für den Western-Blot beträgt das vorhergesagte Molekulargewicht 46 kDa. Verwenden Sie geeignete positive und negative Kontrollen, beispielsweise Lysate stimulierter und unstimulierter Zellen, um die Spezifität zu bestätigen.
• Optimieren Sie bei der Immunhistochemie (IHC-P) die Antigenrückgewinnung und die Antikörperverdünnung für jeden Gewebetyp. Der Nachweis kann in Geweben mit aktivierten Immunantworten verbessert sein.
• Validieren Sie den Antikörper für ELISA mit rekombinantem Irf3-Protein oder bekannten positiven Proben. Für die Entwicklung eines Sandwich-ELISA sollte er mit einem geeigneten Detektionsantikörper kombiniert werden.
• Aufgrund der Rolle von Irf3 in der angeborenen Immunität sollte eine Stimulation der Zellen mit viralen Mimetika (z. B. poly(I:C)) oder Interferonen in Betracht gezogen werden, um die Expression des Zielproteins für einen verbesserten Nachweis hochzuregulieren.

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