Anti-IRE1 Kaninchen-Polyklonaler Antikörper für WB, IF/ICC, IHC-P, ELISA - O75460

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: IRE1-Funktion und -Lokalisierung

• IRE1 (ERN1) ist eine Serin/Threonin-Proteinkinase und Endoribonuklease, die als kritischer Sensor für die Unfolded Protein Response (UPR) im endoplasmatischen Retikulum (ER) dient. In unstressierten Zellen ist ihre luminale Domäne an das Chaperon HSPA5/BiP gebunden; bei Anhäufung von fehlgefalteten Proteinen dissoziiert HSPA5/BiP, wodurch IRE1 homodimerisieren, autophosphorylieren und seine Endoribonuklease-Domäne aktivieren kann. Verwandte Referenzen: PMID:11175748, PMID:11779464, PMID:12637535, PMID:21317875

• Die aktivierte Endoribonuklease spaltet spezifisch XBP1-mRNA und entfernt ein 26-Nukleotid langes Intron, um ein gespleißtes Transkript zu erzeugen, das einen potenten transkriptionellen Aktivator kodiert, der die Expression von UPR-Zielgenen antreibt. Verwandte Referenzen: PMID:11779464, PMID:21317875, PMID:24508390

• IRE1 ist auch am ER-Stress-induzierten unkonventionellen Transport von CFTR zur Zellmembran beteiligt, indem es die Expression und Lokalisierung von SEC16A moduliert. Verwandte Referenzen: PMID:21884936, PMID:28067262

• IRE1 ist ein Single-Pass Typ I-Membranprotein, das hauptsächlich in der Membran des endoplasmatischen Retikulums lokalisiert ist.

• Es wird in humanen Geweben ubiquitär exprimiert, wobei hohe Spiegel in der Bauchspeicheldrüse beobachtet werden.

• Das Protein unterliegt mehreren posttranslationalen Modifikationen, einschließlich Autophosphorylierung, ADP-Ribosylierung, Glykosylierung und Disulfidbindungsbildung, die seine Aktivität regulieren.

• Das Vollständige Protein hat ein berechnetes Molekulargewicht von etwa 110 kDa (UniProt: 109,7 kDa; vom Lieferanten angegeben: 110 kDa).

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen entspricht den Aminosäuren 286–435 in der cytoplasmatischen Region von humanem IRE1, die einen Teil der Kinasedomäne enthält. Diese Region ist zwischen Human, Maus und Ratte gut konserviert, was mit der berichteten Kreuzreaktivität übereinstimmt.
• Für Western Blot (WB) ist eine Bande bei etwa 110 kDa zu erwarten; verwenden Sie reduzierende Bedingungen und validieren Sie die Spezifität mit geeigneten Ladekontrollen und ER-Stress-Induktoren (z. B. Tunicamycin, Thapsigargin).
• Bei Immunfluoreszenz (IF/ICC) und Immunhistochemie (IHC-P) ist das Protein im endoplasmatischen Retikulum lokalisiert; Permeabilisierung ist erforderlich, und eine Co-Färbung mit ER-Markern kann die Validierung unterstützen.
• Für ELISA-Anwendungen sollte der Antikörper als Capture- oder Detektionsreagenz verwendet werden, und die Leistung sollte mit rekombinantem IRE1 oder Zelllysaten aus behandelten vs. unbehandelten Proben validiert werden.

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