Anti-IRE1 Monoklonaler Antikörper für WB, ELISA - O75460

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: IRE1-Funktion und -Lokalisierung

• IRE1 (auch bekannt als IRE1P, IRE1a oder hIRE1p) ist eine ~110 kDa Serin/Threonin-Proteinkinase und Endoribonuklease, die beim Menschen durch das ERN1-Gen kodiert wird.
• IRE1 fungiert als kritischer Sensor in der unfolded protein response (UPR) des endoplasmatischen Retikulums (ER). Unter basalen Bedingungen wird seine luminalen Domäne durch Bindung an HSPA5/BiP inaktiv gehalten. Die Ansammlung fehlgefalteter Proteine löst die Freisetzung, Homodimerisierung, Autophosphorylierung und Aktivierung ihrer Endoribonuklease-Domäne aus. Verwandte Referenzen: PMID:11175748, PMID:11779464, PMID:12637535, PMID:21317875
• Die aktivierte Endoribonuklease-Domäne spaltet spezifisch 26 Nukleotide aus der XBP1-mRNA und erzeugt ein gespleißtes Transkript, das einen potenteren Transkriptionsfaktor kodiert, der die Expression von UPR-Zielgenen antreibt. Verwandte Referenzen: PMID:11779464, PMID:21317875, PMID:24508390
• IRE1 ist ein im ER ansässiges Transmembranprotein, wobei sowohl seine Kinase- als auch seine RNase-Domänen dem Zytoplasma zugewandt sind. Es fungiert als proximales Signal für ER-Stress-vermittelte unkonventionelle Transportwege, wie z. B. die Bereitstellung von CFTR an die Plasmamembran durch Modulation von GORASP2 und SEC16A. Verwandte Referenzen: PMID:21884936, PMID:28067262
• Das Protein unterliegt mehreren posttranslationalen Modifikationen, einschließlich Phosphorylierung, ADP-Ribosylierung und Glykosylierung, und enthält wichtige funktionelle Motive: eine ATP-bindende Kinasedomäne, einen durch Disulfidbindungen stabilisierten luminalen Sensor und eine metallabhängige aktive Stelle der Endoribonuklease.
• IRE1 ist in menschlichen Geweben ubiquitär exprimiert, mit besonders hohen Spiegeln in der Bauchspeicheldrüse, was seiner zentralen Rolle in der ER-Proteostase entspricht.
• Alternativ gespleißte Isoformen und Polymorphismen von ERN1 können die Intensität der UPR-Signalisierung feinabstimmen und zu Entscheidungen über den Zellschicksal zwischen Anpassung und Apoptose beitragen.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das für diesen Antikörper verwendete Immunogen ist ein rekombinantes Fusionsprotein, das die Aminosäuren 286–435 von humanem IRE1 (NP_001424.3) abdeckt, was im Bereich der juxtamembranösen und der Kinasedomäne liegt. Dieser Bereich ist zwischen Mensch, Maus und Ratte konserviert, was die berichtete Kreuzreaktivität unterstützt.
• Für Western-Blot-Anwendungen sollten Sie die Verwendung von ER-Stress-Induktoren (z. B. Tunicamycin, Thapsigargin) in Betracht ziehen, um den IRE1-Nachweis zu verbessern, und den Antikörper im relevanten Probensystem mit geeigneten Ladungskontrollen validieren.
• Optimieren Sie bei ELISA die Beschichtungs- und Nachweisbedingungen, da der Antikörper ein lineares Epitop innerhalb der Immunogensequenz erkennt.
• Das vorhergesagte Molekulargewicht beträgt ~110 kDa, aber posttranslationale Modifikationen und aktivierungsinduzierte Phosphorylierungen können zu leichten Mobilitätsverschiebungen führen; bestätigen Sie dies mit Molekulargewichtsmarkern.

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