Anti-IRAK4 Poliklonaler Antikörper für WB, IF/ICC, ELISA - Q9NWZ3

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung von IRAK4

• IRAK4 (Interleukin-1-Rezeptor-assoziierte Kinase 4) ist eine Serin/Threonin-Kinase, die für die Signalübertragung der angeborenen Immunität essenziell ist und beim Menschen vom IRAK4-Gen kodiert wird. Es ist auch bekannt als Nierenkarzinom-Antigen NY-REN-64.
• Nach Aktivierung von Toll-ähnlichen Rezeptoren (TLR) oder dem Interleukin-1-Rezeptor (IL-1R) wird IRAK4 von MYD88 rekrutiert, bildet zusammen mit IRAK2 den Myddosom-Komplex und initiiert die nachgeschaltete Signalübertragung. Verwandte Referenzen: PMID:17878374
• IRAK4 phosphoryliert IRAK1, das anschließend autophosphoryliert wird und einen Komplex mit TRAF6 und TAK1 bildet; es phosphoryliert zudem Pellino-Proteine (PELI1, PELI2, PELI3), um die Polyubiquitinierung von IRAK1 zu fördern. Dies führt letztendlich zur nukleären Translokation von NF-κB und zur Aktivierung der Expression entzündungsbedingter Gene.
• Alternativ phosphoryliert IRAK4 TIRAP, um dessen Ubiquitinierung und Degradation zu fördern, und phosphoryliert NCF1, um die Aktivierung der NADPH-Oxidase nach LPS-Stimulation zu regulieren – dies deutet auf eine Rolle bei mikrobiziden Reaktionen hin.
• Subzellulär ist IRAK4 hauptsächlich im Zytoplasma lokalisiert, was mit seiner Funktion bei der Assemblierung von Signalosomen an membrannahen Stellen übereinstimmt.
• Mit IRAK4 verbundene Schlüsselwörter sind Kinase, Nukleotidbindung, Magnesium, Acetylierung, alternatives Spleißen und Krankheitsvarianten; Mutationen in IRAK4 sind mit primären Immundefizienzen wie IPD1 und IMD67 verbunden, die durch eine erhöhte Anfälligkeit für pyogene bakterielle Infektionen gekennzeichnet sind.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Der Antikörper wurde gegen ein N-terminales Fragment (Aa 1-200) erzeugt, das die Todesdomäne des menschlichen IRAK4 abdeckt; er kann gegebenenfalls sowohl die volllängige als auch N-terminal verkürzte Isoformen erkennen, falls diese vorhanden sind.
• Für das Western Blotting ist eine Bande bei ca. 52 kDa in Lysaten von menschlichen, Maus- oder Ratten-Zelllinien zu erwarten; das Molekulargewicht kann aufgrund von Phosphorylierung oder Gelbedingungen leicht abweichen.
• Bei der Immunfluoreszenz/ICC sollte eine zytoplasmatische Lokalisierung beobachtet werden; verwenden Sie geeignete Protokolle für Fixierung und Permeabilisierung.
• Für die ELISA empfehlen wir eine Titration des Antikörpers und die Optimierung der Konzentration des beschichteten Antigens, um das beste Signal-Rausch-Verhältnis zu erzielen.
• Eine Kreuzreaktivität mit Maus- und Ratten-IRAK4 ist vom Hersteller angegeben; eine Validierung in Ihren spezifischen Probensystemen wird vor großangelegten Studien empfohlen.
• Um die IRAK4-Aktivierung zu untersuchen, stimulieren Sie Zellen mit IL-1β oder TLR-Liganden (z. B. LPS) und bestimmen Sie den Phosphorylierungsstatus oder die Komplexbildung mittels Ko-Immunpräzipitation.

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