Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung des Insulin-abbauenden Enzyms (IDE)

• Das Insulin-abbauende Enzym (IDE), auch bekannt als Insulysin, Insulinprotease oder Abeta-abbauende Protease, ist eine hochkonservierte Zink-Metalloprotease, die am Abbau mehrerer Peptidhormone und Signalmoleküle beteiligt ist.
• IDE vermittelt den zellulären Abbau von Insulin, Glucagon und Insel-Amyloid-Polypeptid (IAPP) und spielt eine entscheidende Rolle bei der Regulation der Blutglukosehomöostase. Verwandte Referenzen: PMID:10684867 PMID:17051221 PMID:17613531
• IDE baut Amyloid-beta (Abeta)-Peptide ab, die vom Amyloid-Vorläuferprotein (APP) stammen, und trägt so zur Beseitigung neurotoxischer Aggregate bei, die mit der Alzheimer-Krankheit in Verbindung stehen. Verwandte Referenzen: PMID:26394692 PMID:9830016
• Es inaktiviert natriuretische Peptide (ANP, BNP, CNP) durch Spaltung und dämpft so die cGMP-vermittelte Signalübertragung; IDE verarbeitet auch eine krankheitsassoziierte frameshift-Form von NPPA, die mit familiärem Vorhofflimmern in Verbindung gebracht wird. Verwandte Referenzen: PMID:21098034
• Die Substratbindung induziert große Konformationsänderungen in IDE, die es dem Enzym ermöglichen, größere Substrate wie Insulin aufzunehmen und abzubauen. Verwandte Referenzen: PMID:23922390 PMID:26394692 PMID:29596046
• IDE ist an der Antigenverarbeitung beteiligt und erzeugt die N- und C-Termini des von MHC-Klasse-I-Molekülen präsentierten, von MAGEA3 abgeleiteten Peptids.
• Das Enzym ist hauptsächlich im Zytosol lokalisiert, kommt aber auch an der Zellmembran und sezerniert vor; im Gehirn wird es in Neuronen und Liquor cerebrospinalis nachgewiesen.
• IDE wirkt als allosterisches Enzym mit ATP-Bindungsfähigkeit und fungiert als Wirtszellrezeptor für den Eintritt des Varicella-Zoster-Virus.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Der monoklonale Kaninchenantikörper wurde gegen ein synthetisches Peptid hergestellt, das der N-terminalen Region (Aminosäuren 1-100) des humanen IDE entspricht; diese Epitop ist bei Mensch, Maus und Ratte hochkonserviert, was mit der berichteten Kreuzreaktivität übereinstimmt.
• Für die Western-Blot (WB)-Analyse sollte aufgrund des relativ hohen Molekulargewichts von IDE (~118 kDa) die Verwendung eines Gels mit niedrigem SDS-PAGE-Prozentsatz und längeren Transferzeiten in Betracht gezogen werden, um eine effektive Proteinauftrennung und Membranübertragung zu gewährleisten.
• Validieren Sie bei ELISA-Anwendungen die Antikörperleistung unter nativen und denaturierenden Bedingungen, um die Spezifität für das Zielepitop zu bestätigen und das Signal-Rausch-Verhältnis zu optimieren.
• Da IDE in mehreren Geweben exprimiert wird, insbesondere aber im Gehirn reichlich vorhanden ist und sezerniert werden kann, kann bei der Analyse physiologischer Flüssigkeiten oder Zellüberstände eine geeignete Probenvorbereitung (z. B. Konzentrierung von Liquor cerebrospinalis) erforderlich sein.

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