Anti-IL1β Kaninchen-Monoklonaler Antikörper für WB, IF/ICC, ELISA - P10749

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von IL1β

• Interleukin-1 beta (IL1β) ist ein potentes proentzündliches Zytokin der Interleukin-1-Familie, das bei der Maus durch das Gen Il1b kodiert wird (Gen-ID: 16176, UniProt P10749). Das Protein wird als 31 kDa-Vorläufer synthetisiert, der anschließend gespalten wird, um eine reife, sekretierte Form zu erzeugen.
• IL1β wurde ursprünglich als wichtigster endogener Pyrogen identifiziert, der Fieber auslösen kann. Es stimuliert die Prostaglandin-Synthese, fördert den Einstrom und die Aktivierung von Neutrophilen und reguliert sowohl die Funktion von T- als auch von B-Zellen, wodurch es adaptive Immunantworten antreibt.
• IL1β spielt eine zentrale Rolle in der Entzündungskaskade: es wirkt synergistisch mit IL12, um die Produktion von Interferon-Gamma (IFNG) durch Th1-Zellen zu induzieren und fördert die Differenzierung von Th17-Zellen. Darüber hinaus unterstützt es die Angiogenese, indem es in Kombination mit TNF und IL6 die VEGF-Produktion induziert.
• Die reife Form von IL1β wird über einen nicht-klassischen Sekretionsweg extrazellulär freigesetzt. Nach Aktivierung des Inflammasoms und Einleitung der Pyroptose tritt reifes IL1β passiv durch Gasdermin-D (GSDMD)-Poren in der Plasmamembran aus, wodurch angeborene Immunerkennung mit Entzündung verknüpft wird.
• Subzellulär befindet sich IL1β im Zytosol und in Lysosomen und wird aktiv sezerniert. Es ist außerdem mit extrazellulären Exosomen assoziiert, was auf mehrere Sekretionswege hindeutet (UniProt: SUBCELLULÄRE LOKALISATION).
• Die Expression von IL1β ist streng reguliert und wird auf Proteinebene überwiegend in aktivierten Makrophagen beobachtet, was mit seiner Rolle in der angeborenen Immunität übereinstimmt (UniProt: GEWEBSSPEZIFITÄT).

Experimentelle Anleitung und Technische Tipps

• Das Immunogen entspricht den Aminosäuren 118-269 des Maus-IL1β-Vorläufers (NP_032387.1) und deckt die Region des reifen IL1β ab. Der Antikörper kann sowohl den ~31 kDa großen Vorläufer als auch die ~17 kDa große reife Form erkennen – dies hängt von der Probe und dem Aktivierungszustand ab. Es wird empfohlen, geeignete Molekulargewichtsmarker und Positivkontrollen (z. B. LPS-stimulierte Makrophagenlysate) zu verwenden, um die spezifischen Banden zu identifizieren.
• Verwenden Sie für den Western Blot (WB) eine reduzierende SDS-PAGE und Standard-Transferprotokolle. Für den Volllängen-Vorläufer ist eine Bande um 31 kDa zu erwarten, während in sezernierten oder gespaltenen Proben eine Bande bei ~17 kDa auftreten kann.
• Bei Immunfluoreszenz/ICC (IF/ICC) sollten Sie Stimulationskontrollen (z. B. LPS ± ATP) einschließen, um die Expression und Sekretion von IL1β zu induzieren, da die Basalspiegel niedrig sein können. Co-Färbung mit Organellenmarkern kann helfen, die zytosolische oder sezernierte Lokalisation sichtbar zu machen.
• Für ELISA sollten Sie bei Verwendung dieses Antikörpers als Capture-Reagenz eine Kombination mit einem geeigneten Detektionsantikörper in Betracht ziehen, der eine andere Epitop erkennt. Validieren Sie den Assay mit rekombinanten Maus-IL1β-Standards und biologischen Proben.
• Kreuzreaktivität ist für Maus bestätigt; führen Sie bei Verwendung mit anderen Spezies eine spezies-spezifische Validierung durch. Endogenes Maus-IgG kann zu Hintergrundsignalen in Mausgeweben führen; die Verwendung von Anti-Kaninchen-Sekundärantikörpern und geeigneter Blockierung kann dies reduzieren.

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