Anti-IHH Kaninchen-Polyklonaler Antikörper für WB und ELISA - Q14623

Kernprodukt-Spezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: IHH-Funktion und -Lokalisierung

• IHH (Indian hedgehog protein) ist ein Mitglied der Hedgehog-Familie, kodiert durch das IHH-Gen. Das Vorläuferprotein vollständiger Länge unterliegt einer autoproteolytischen Spaltung und Cholesterinmodifikation, um das aktive N-Produkt-Morphogen zu erzeugen.
• Das N-Produkt von IHH aktiviert den Smoothened-Signalweg durch Bindung an Patched-Rezeptoren (PTCH1/2), wodurch die SMO-Hemmung aufgehoben wird, was für die Knochen- und Knorpelentwicklung wesentlich ist.
• IHH reguliert die PTHLH-Expression positiv, um Chondrozytenhypertrophie während der endochondralen Knochenbildung zu verhindern, und fördert unabhängig davon die Proliferation von Chondrozyten.
• IHH spielt eine Rolle bei der Hedgehog-Parakrin-Signalisierung (PMID:24342078) und wirkt, wenn es mit VLDL-Partikeln assoziiert ist, als zirkulierendes Morphogen zur Aufrechterhaltung der Integrität von Endothelzellen (PMID:208398844). Verwandte Referenzen: PMID:24342078 PMID:20839884
• Über die Skelettentwicklung hinaus ist IHH an der Entwicklung des retinalen Pigmentepithels, der Photorezeptoren und der periokularen Gewebe beteiligt.
• Subzellulär befindet sich das Protein in den Membranen des endoplasmatischen Retikulums und des Golgi-Apparats; das sezernierte N-Produkt kann mit der Zellmembran assoziieren.
• Die Gewebeexpression wird in embryonaler Lunge sowie in adulter Niere und Leber beobachtet.
• Wichtige posttranslationale Modifikationen umfassen autokatalytische Spaltung, Cholesterinbindung und Palmitoylierung; das Protein ist als Glykoprotein und Lipoprotein klassifiziert.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen entspricht den Aminosäuren 202–411 von menschlichem IHH und deckt einen Bereich distal zur autokatalytischen Spaltstelle ab. Das Protein vollständiger Länge hat ein vorhergesagtes Molekulargewicht von 45 kDa, aber beachten Sie, dass endogenes IHH verarbeitet werden kann, was zu zusätzlichen Bändern im WB führt.
• Für Western Blots validieren Sie die Antikörperspezifität mithilfe geeigneter positiver Kontrollen (z. B. Gewebe oder Zellen, von denen bekannt ist, dass sie IHH exprimieren) und erwägen Sie die Verwendung einer Ladungskontrolle. Optimieren Sie Blockierungs- und Detektionsbedingungen empirisch.
• Dieser polyklonale Antikörper reagiert mit menschlichem, Maus- und Ratten-IHH, was ihn für kreuzspezifische Studien geeignet macht. Bestätigen Sie jedoch die Reaktivität in der Zielspezies, wenn sie nicht zuvor validiert wurde.
• Für ELISA sollten die Titerung des Antikörpers und die optimalen Konzentrationen des Beschichtungsantigens experimentell bestimmt werden.
• Wie bei jedem polyklonalen Reagenz können Chargenunterschiede auftreten; erwägen Sie die Bereitstellung eines Kalibrierungsstandards für konsistente Ergebnisse.

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