Anti-Human-Parkin-Polyklonalantikörper für WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - O60260

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: Parkin-Funktion und -Lokalisierung

• Parkin, kodiert durch das PRKN (PARK2)-Gen, ist eine E3-Ubiquitin-Protein-Ligase, die innerhalb eines Multiproteinkomplexes funktioniert, um die kovalente Anheftung von Ubiquitin-Einheiten an Substratproteine zu katalysieren und zelluläre Prozesse wie Proteindegradation, mitochondriale Qualitätskontrolle und Zellüberleben vermittelt. Verwandte Referenzen: PMID:10888878, PMID:10973942, PMID:11431533

• Parkin ubiquitiniert eine Vielzahl von Substraten, darunter SYT11, VDAC1, BCL2, CCNE1, GPR37, RHOT1/MIRO1, MFN1, MFN2, SNCAIP, TOMM20 und ZNF746; es kann sowohl Monoubiquitinierung als auch verschiedene Polyubiquitin-Kettenverknüpfungen (Lys-6, Lys-11, Lys-48, Lys-63) in Abhängigkeit vom zellulären Kontext vermitteln. Verwandte Referenzen: PMID:29311685, PMID:32047033, PMID:10888878, PMID:10973942, PMID:11431533, PMID:19229105, PMID:20889974, PMID:25474007

• Eine Schlüsselfunktion von Parkin ist die Aufrechterhaltung der mitochondrialen Integrität; bei mitochondrialer Schädigung rekrutiert die PINK1-vermittelte Phosphorylierung Parkin zur äußeren mitochondrialen Membran, wo es Proteine ubiquitiniert, um Mitophagie und mitochondriale Spaltung zu fördern und so dysfunktionale Organellen zu eliminieren. Verwandte Referenzen: PMID:11439185, PMID:18957282, PMID:19029340, PMID:24660806, PMID:24784582, PMID:25474007

• Parkin ubiquitiniert direkt mitochondriale Außenmembranproteine wie TOMM20, MFN1, MFN2, MIRO1 und USP30, löst Mitophagie aus und verhindert die Fusion geschädigter Mitochondrien mit gesunden Netzwerken; es reguliert auch die mitochondriale Motilität über MIRO1-Degradation. Verwandte Referenzen: PMID:19029340, PMID:19966284, PMID:21753002, PMID:22396657, PMID:23620051

• Jenseits der Mitophagie schützt Parkin Zellen vor Apoptose, indem es BCL2 monoubiquitiniert, um Autophagie zu fördern, den mitochondrialen Calcium-Einstrom begrenzt und p53 transkriptionell reprimiert; es kann auch als Tumorsuppressor fungieren. Verwandte Referenzen: PMID:20889974, PMID:19801972, PMID:32047033, PMID:12719539, PMID:11439185

• Homozygote oder compound heterozygote Mutationen in PRKN sind eine Hauptursache für autosomal-rezessive juvenile Parkinson-Krankheit (PDJ); Parkin wird im Gehirn, insbesondere in der Substantia nigra, stark exprimiert, und seine Spiegel sind im Gehirn von PARK2-Patienten und in vielen Tumoren reduziert. Verwandte Referenzen: PMID:9560156, PMID:12719539, PMID:14614460, PMID:19501131

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen umfasst die N-terminalen 387 Aminosäuren von humanem Parkin, was darauf hindeutet, dass der Antikörper mehrere Epitope erkennen und sowohl endogenes Parkin als auch rekombinantes Protein nachweisen könnte.
• Für Western Blot wird eine Bande bei etwa 52 kDa erwartet; es können jedoch aufgrund posttranslationaler Modifikationen oder Isoformen Nebenbanden auftreten, und es wird empfohlen, geeignete Kontrollen (z.B. Parkin-Knockout-Lysate) einzubeziehen.
• Angesichts der Kreuzreaktivität mit Maus und Ratte könnte dieser Antikörper für die Untersuchung von Parkin in Nagetiermodellen der Parkinson-Krankheit geeignet sein; erwägen Sie die Validierung des Antikörpers in Ihrem spezifischen Gewebe- oder Zellsystem mittels IHC-P oder IF/ICC unter Verwendung einer Co-Färbung für mitochondriale Marker.
• Optimale Arbeitsverdünnungen und Bedingungen sollten empirisch für jede Anwendung bestimmt werden; für polyklonale Antikörper werden üblicherweise Ausgangsverdünnungen von 1:500-1:2000 für WB, 1:50-1:200 für IHC-P und 1:50-1:200 für IF/ICC verwendet.
• Für ELISA kann der Antikörper als Capture- oder Detektionsantikörper verwendet werden, wenn er mit einem geeigneten sekundären Antikörper gepaart wird; die Leistung kann je nach Antigenpräsentation variieren.

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