Anti-Human CD59 monoklonaler Antikörper für die Durchflusszytometrie - P13987

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: CD59-Funktion und -Lokalisierung

• CD59, auch bekannt als Protectin, MAC-inhibitorisches Protein (MAC-IP), 20 kDa homologer Restriktionsfaktor (HRF-20) und 1F5-Antigen, ist ein GPI-verankertes Zelloberflächen-Glykoprotein, das als kritischer Inhibitor des Komplement-Membranangriffskomplexes (MAC) fungiert.
• Es bindet an die C8-Komponente (C8A und C8B) des sich bildenden MAC und bildet eine intermolekulare Beta-Faltblatt-Struktur, die den Einbau mehrerer C9-Moleküle verhindert, wodurch die Bildung der osmolytischen Pore blockiert und menschliche Zellen vor komplementvermittelter Lyse geschützt werden (PubMed:11882685, PubMed:1698710, PubMed:2475111, PubMed:36797260). Verwandte Referenzen: PMID:11882685, PMID:1698710, PMID:2475111, PMID:36797260
• Eine lösliche Form von CD59, die im Urin gefunden wird, behält die Komplementbindungsaktivität bei, zeigt jedoch eine stark reduzierte Fähigkeit, die MAC-Bildung auf Zellmembranen zu hemmen.
• Das Protein ist über einen GPI-Anker an der Zellmembran lokalisiert; eine sekretierte Form wurde ebenfalls nachgewiesen.
• CD59 unterliegt alternativem Spleißen und posttranslationalen Modifikationen, einschließlich Disulfidbindungsbildung, Glykierung und N-verknüpfter Glykosylierung; Mutationen in CD59 sind mit hereditärer hämolytischer Anämie assoziiert.
• Die vorhergesagte Molekülmasse von CD59 beträgt 14177 Da, was mit seiner beobachteten Migration bei ~14–18 kDa in der SDS-PAGE übereinstimmt.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen umfasst die extrazelluläre Domäne (aa 26–101) von humanem CD59, welche die Schlüsselbindungsstellen für den MAC enthält; dieses Design kann die Erkennung von nativen, korrekt gefalteten Konformationen begünstigen.
• Für die Durchflusszytometrie sollten lebende, unfixierte Zellen verwendet werden, um das GPI-verankerte CD59 an der Zelloberfläche zu erhalten; eine Fc-Rezeptor-Blockierung wird empfohlen, um unspezifische Bindung zu minimieren.
• Titrieren Sie den Antikörper unter Ihren spezifischen experimentellen Bedingungen, um die optimale Verdünnung zu bestimmen; schützen Sie das Konjugat vor Licht und vermeiden Sie wiederholte Gefrier-Tau-Zyklen, um die Fluorophorstabilität zu erhalten.
• Validieren Sie die Spezifität unter Verwendung von CD59-positiven Zellen (z.B. Leukozyten) und CD59-Knockout- oder -defizienten Kontrollen; ein komplementärer Nachweis mit einem Anti-GPI-Anker-Marker kann die Membranlokalisation bestätigen.

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