Anti-HSPA4 Kaninchen monoklonaler Antikörper für WB, IHC-P, ELISA - P34932

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: HSPA4-Funktion und Lokalisierung

• HSPA4 (Hitzeschock 70 kDa Protein 4) ist auch bekannt als HSP70RY, APG-2 und Hitzeschock-Proteinfamilie H Mitglied 2. Es wird durch das HSPA4-Gen (auch als APG2 oder HSPH2 bezeichnet) auf humanem Chromosom 5 kodiert.
• Als Mitglied der Hsp70-Familie besitzt HSPA4 eine hochkonservierte ATPase-Domäne und eine Substratbindungsdomäne, die es ihm ermöglichen, als ATP-abhängiger molekularer Chaperon zu fungieren, der an der Proteinfaltung und Stressantwort beteiligt ist.
• Das Protein enthält Nukleotid-Bindungsmotive, was mit seiner ATP-Bindungsfähigkeit übereinstimmt, die für seinen Chaperon-Zyklus und die Interaktion mit Co-Chaperonen essentiell ist.
• Subzelluläre Lokalisierungsstudien deuten darauf hin, dass HSPA4 überwiegend im Zytoplasma vorkommt, wo es seine Chaperon-Funktionen sowohl unter normalen als auch unter Stressbedingungen ausübt.
• Posttranslationale Modifikationen von HSPA4 umfassen Acetylierung, Phosphorylierung und Methylierung, die seine Aktivität, Stabilität oder Protein-Protein-Interaktionen regulieren können.
• Alternatives Spleißen des HSPA4-Transkripts führt zu mehreren Isoformen, was möglicherweise seine funktionelle Vielfalt in verschiedenen zellulären Kontexten erweitert.
• HSPA4 wird als Stressantwort-Protein klassifiziert, und seine Expression wird wahrscheinlich unter Bedingungen von zellulärem Stress hochreguliert, um Proteinaggregation zu verhindern und die Proteostase aufrechtzuerhalten.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das für diesen Antikörper verwendete Immunogen ist ein synthetisches Peptid, das die Aminosäuren 700–800 von humanem HSPA4 (P34932) umfasst. Diese Region befindet sich in der C-terminalen Domäne, die unter Mitgliedern der Hsp70-Familie weniger konserviert ist und möglicherweise die Zielspezifität verleiht.
• Für Western-Blot (WB)-Anwendungen sollte ein Standard-Denaturierungs-SDS-PAGE-Protokoll mit einer Proteinleiter, die den 94 kDa-Bereich abdeckt, in Betracht gezogen werden. Optimieren Sie die Transferbedingungen für hochmolekulare Proteine und validieren Sie den Nachweis mit geeigneten positiven Kontrollen (z. B. HeLa- oder HEK293-Lysaten).
• Bei der Immunhistochemie (IHC-P) sollten Antigenretrieval-Methoden (z. B. hitzeinduziertes Epitop-Retrieval bei pH 6 oder 9) und Antikörperverdünnungen empirisch für jeden Gewebetyp optimiert werden, um den Hintergrund zu reduzieren und eine spezifische Färbung zu erreichen.
• Für ELISA sollte sichergestellt werden, dass das Paar aus Beschichtungsantigen und Detektionsantikörper gründlich getestet wurde, und es sollten Schachbretttitrationen durchgeführt werden, um optimale Arbeitskonzentrationen zu ermitteln.
• Da dieser Antikörper gegen ein Peptid-Immunogen hergestellt wurde, erkennt er möglicherweise lineare Epitope, die unter denaturierenden Bedingungen (z. B. WB) exponiert sind, benötigt jedoch möglicherweise eine Validierung in nativen Konformationsassays.

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