Anti-HPRT1 Kaninchen monoklonaler Antikörper für WB und ELISA - P00492

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: HPRT1-Funktion und -Lokalisierung

• Hypoxanthin-Guanin-Phosphoribosyltransferase (HPRT1) katalysiert über den Purin-Salvage-Weg die Umwandlung von Hypoxanthin zu IMP und Guanin zu GMP und recycelt so Purinbasen zu Nukleotiden.
• HPRT1 überträgt die 5-Phosphoribosylgruppe von 5-Phosphoribosylpyrophosphat (PRPP) auf Purinbasen und spielt eine zentrale Rolle bei der Erzeugung von Purinnukleotiden für die Nukleinsäuresynthese und die zelluläre Energetik.
• HPRT1 ist ein Mitglied der Purin/Pyrimidin-Phosphoribosyltransferase-Familie, die über Spezies hinweg konserviert ist, und wird durch das HPRT1-Gen (HGPRT) auf dem X-Chromosom kodiert.
• Subzellulär ist HPRT1 hauptsächlich im Zytoplasma lokalisiert, wo es Zugang zu seinen Substraten für Salvage-Reaktionen hat.
• Posttranslationale Modifikationen umfassen Acetylierung, Phosphorylierung und Isopeptidbindungsbildung (Ubiquitinierung), die seine Aktivität oder Stabilität regulieren können.
• Mutationen in HPRT1 verursachen das Lesch-Nyhan-Syndrom, eine schwere neurologische Störung, und sind aufgrund einer Purinüberproduktion durch einen defekten Salvage-Weg mit Gicht assoziiert.
• Das Enzym benötigt Magnesium als Kofaktor und bindet Nukleotide, was seine Rolle bei der Phosphoribosyl-Übertragung widerspiegelt.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das auf einer zentralen Region von HPRT1 (aa 119-218) basierende Immunogen-Design kann Spezifität für das Ziel bieten und gleichzeitig N-terminale oder C-terminale Variabilität vermeiden. Aufgrund der hohen Sequenzkonservierung sollte ein Test in relevanten Spezies (Mensch, Maus, Ratte) in Betracht gezogen werden.
• Für den Western Blot liegt die erwartete Bande bei etwa 25 kDa; verwenden Sie geeignete Molekulargewichtsmarker. Wenn eine Knockout-Validierung erforderlich ist, schließen Sie HPRT1-KO-Zelllysate ein, um die Spezifität zu bestätigen.
• Bei ELISA kann ein standardisierter indirekter Assay mit dem Peptid oder rekombinanten HPRT1-Protein eingesetzt werden; eine Optimierung der Beschichtungsbedingungen und der Antikörperverdünnung sollte in Betracht gezogen werden.
• Da HPRT1 ubiquitär exprimiert wird, bestätigen Sie die Expression in Ihrem Probentyp; es kann in einigen Experimenten als Ladungskontrolle dienen.
• Die Kreuzreaktivität mit Maus- und Ratten-HPRT1 ermöglicht translationale Studien; validieren Sie dies im gewünschten Modellsystem.

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