Anti-HMGCS2-Kaninchen-monoklonaler Antikörper für WB, IF, IHC-P, ELISA – P54868

Zentrale Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung von HMGCS2

• HMGCS2 katalysiert den ersten irreversiblen Schritt der Ketogenese, indem es Acetyl-CoA und Acetoacetyl-CoA zu 3-Hydroxy-3-methylglutaryl-CoA (HMG-CoA) kondensiert. Dieses HMG-CoA kann durch die HMG-CoA-Reduktase auch in Mevalonat umgewandelt werden, wodurch ketogene und cholesterinbildende Stoffwechselwege miteinander verbunden werden.
• Das Enzym ist in der mitochondrialen Matrix lokalisiert, was seiner Rolle bei der hepatischen Produktion von Ketonkörpern entspricht.
• HMGCS2 wird überwiegend in der Leber exprimiert, wobei quantitative Analysen mehr als 200-fach höhere Spiegel als in anderen Geweben zeigen. Eine geringe Expression wird im Kolon, in der Niere, im Hoden und in der Bauchspeicheldrüse nachgewiesen, eine sehr geringe im Herzen und in der Skelettmuskulatur; im Gehirn fehlt es (PubMed:16940161, PubMed:21952825, PubMed:7893153). Bemerkenswerterweise weisen Transkriptdaten auf die höchste Expression im Herzen und in der Skelettmuskulatur hin, was auf eine posttranskriptionale Regulation oder Unterschiede zwischen Isoformen schließen lässt. Verwandte Referenzen: PMID:16940161 PMID:21952825 PMID:7893153
• Alternatives Spleißen erzeugt mehrere Isoformen, die zusammen mit posttranslationaler Acetylierung und Phosphorylierung zu den beobachteten Proteinbanden bei 50, 52 und 56 kDa beitragen.
• Mutationen in HMGCS2 stehen mit Stoffwechselstörungen in Zusammenhang (Krankheitsvariante), was seine klinische Bedeutung unterstreicht.

Experimentelle Anleitung und technische Hinweise

• Das Immunogen wurde unter Verwendung eines Peptids aus der C-terminalen Region (AS 400–500) des humanen HMGCS2 entwickelt, eine Strategie, die die Spezifität erhöhen kann. Bei der Anpassung dieses Ansatzes sollten die Sequenzen zwischen den Spezies abgeglichen werden, wenn eine Kreuzreaktivität gewünscht ist.
• Beim Western Blotting sind aufgrund von Isoformen und Modifikationen mehrere Banden zwischen 50 und 56 kDa zu erwarten; verwenden Sie Molekulargewichtsmarker und geeignete Positivkontrollen (z. B. Leberlysat).
• Für die Immunhistochemie (IHC-P) kann eine Antigenretrieval-Behandlung erforderlich sein; rechnen Sie mit einer mitochondrialen Färbung. Die Immunfluoreszenz (IF/ICC, IF-P) sollte ein punktförmiges mitochondriales Muster zeigen.
• Der Antikörper wurde an Proben von Mensch, Maus und Ratte getestet und eignet sich daher für Vergleichsstudien in Nagetiermodellen der Ketogenese oder des hepatischen Stoffwechsels.
• Für ELISA-Anwendungen kann eine Optimierung der Beschichtungsbedingungen und der Antikörpertiter für den jeweiligen Analyten erforderlich sein.

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