Anti-HMGB1 Kaninchen-monoklonaler Antikörper (KO-validiert) für WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P09429

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation des High-Mobility-Grupp-Proteins B1

• HMGB1 (High-Mobility-Grupp-Protein B1, auch bekannt als HMG-1) ist ein multifunktionales redoxempfindliches Protein, das im Zellkern als DNA-Chaperon wirkt, wo es an Replikation, Transkription, Chromatinremodellierung, V(D)J-Rekombination, DNA-Reparatur und Genomstabilität beteiligt ist. (PubMed:33147444) Zugehörige Referenzen: PMID:33147444
• Es fungiert als gefahrenassoziiertes molekulares Muster (DAMP), wenn es extrazellulär freigesetzt wird, und vermittelt entzündliche und immunologische Reaktionen durch Bindung an Rezeptoren wie RAGE, TLR2 und TLR4. (PubMed:27362237, PubMed:34743181) Zugehörige Referenzen: PMID:27362237 PMID:34743181
• Die Aktivität von HMGB1 wird durch seinen Redoxzustand bestimmt: die vollständig reduzierte Form wirkt als Chemokin, die Disulfidform als Zytokin und die Sulfonylform fördert die immunologische Toleranz. (PubMed:23446148, PubMed:23519706, PubMed:23994764) Zugehörige Referenzen: PMID:23446148 PMID:23519706 PMID:23994764
• Die subzelluläre Lokalisation von HMGB1 ist dynamisch und umfasst den Zellkern, Chromosomen, Zytoplasma, Zellmembran, Endosomen, endoplasmatisches Retikulum sowie sezernierte Formen.
• Posttranslationale Modifikationen wie Acetylierung, ADP-Ribosylierung, Phosphorylierung und Oxidation regulieren die subzelluläre Verteilung und funktionellen Aktivitäten von HMGB1.
• HMGB1 ist ubiquitärexprimiert, eine nachgewiesene Expression liegt in Blutplättchen vor. (PubMed:11154118) Zugehörige Referenzen: PMID:11154118
• Das Protein spielt eine Rolle bei Wirts-Virus-Interaktionen, es ist kritisch für den Eintritt von SARS-CoV-2 und SARS-CoV und erleichtert die Replikation von Influenza A, EBV und Dengue-Virus. (PubMed:33147444, PubMed:35239449) Zugehörige Referenzen: PMID:33147444 PMID:35239449

Experimentelle Anleitung und Technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches Peptid, das den Aminosäuren 100–200 von humanem HMGB1 entspricht. Erwägen Sie die Verwendung von volllängen rekombinantem Protein oder Epitop-Mapping, um die Nachweisspezifität zu bestätigen.
• Für das Western Blotting hat HMGB1 ein vorhergesagtes Molekulargewicht von ~25 kDa; aufgrund posttranslationaler Modifikationen oder Redoxzustände können mehrere Banden auftreten.
• Optimieren Sie bei IHC-P die Methoden zur Antigen-Retrieval und validieren Sie mit Geweben mit bekannten HMGB1-Expressionsmustern (z. B. Mandel, Leber). Fügen Sie geeignete Positiv- und Negativkontrollen hinzu.
• Beachten Sie bei IF/ICC, dass HMGB1 je nach zellulärem Stress zwischen Zellkern und Zytoplasma wechseln kann. Behandeln Sie Zellen mit Stimuli wie LPS oder TNF-α, um die Translokation zu beurteilen.
• Stellen Sie bei ELISA sicher, dass das Antikörperpaar für das gewählte Assayformat validiert ist; die Epitopregion (100–200) sollte in der Target-Antigen-Präparation zugänglich sein.

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