Anti-HLA-DR monoklonaler Antikörper für WB, IF/ICC, IHC-P, ELISA - P01903

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation der HLA-DR-Alphakette

• HLA-DRA (auch bekannt als HLA-DRA1) ist ein Gen auf Chromosom 6, das die Alphakette von MHC-Klasse-II-Molekülen kodiert, mit einem vorhergesagten Molekulargewicht von etwa 29 kDa (reife Form nach Spaltung des Signalpeptids etwa 26 kDa).
• Die kodierte Alphakette assembliert mit der Betakette HLA-DRB zu funktionalen HLA-DR-Heterodimeren, die antigene Peptide an CD4-positive T-Zellen präsentieren und T-Helfer-Effektorfunktionen sowie Makrophagenaktivierung steuern (PubMed:15265931, PubMed:15322540, PubMed:17334368). Verwandte Referenzen: PMID:15265931 PMID:15322540 PMID:17334368
• Die Beladung von Peptidantigenen folgt zwei unterschiedlichen Verarbeitungsmodi: „Zuerst binden, dann schneiden/trimmen“ für Pathogen-abgeleitete Peptide und „Zuerst schneiden, dann binden“ für Eigenpeptide, wobei das N-terminale Ankerrest (typischerweise eine große hydrophobe Aminosäure) essentiell für die MHCII-Bindung ist (PubMed:25413013, PubMed:8145819). Verwandte Referenzen: PMID:25413013 PMID:8145819
• Im Tumormikromilieu präsentiert HLA-DR Tumor-abgeleitete Antigene, die durch APCs via Phagozytose oder Makropinozytose aufgenommen wurden, und unterstützt so anti-tumorale CD4+ T-Zell-Antworten (PubMed:31495665). Verwandte Referenzen: PMID:31495665
• Der HLA-DR-Komplex zyklisiert durch endosomale und lysosomale Kompartimente, einschließlich Autolysosomen, wo er Peptide aus intrazellulären Proteinen aus Autophagie präsentiert – ein Mechanismus, der für die thymische T-Zell-Selektion und zentrale Toleranz kritisch ist (PubMed:17182262, PubMed:23783831). Verwandte Referenzen: PMID:17182262 PMID:23783831
• HLA-DRA wird auf Proteinebene in professionellen antigenpräsentierenden Zellen exprimiert – Makrophagen, dendritische Zellen, B-Zellen – sowie in thymischen Epithelzellen, was mit seiner Rolle bei der adaptiven Immunität übereinstimmt (PubMed:15322540, PubMed:23783831, PubMed:31495665). Verwandte Referenzen: PMID:15322540 PMID:23783831 PMID:31495665
• HLA-DRA ist ein transmembranäres Glykoprotein mit Disulfidbindungen und potenzieller Ubiquitinierung (Isopeptidbindung), was seine Stabilität und Trafficking während der Bildung von Immunsynapsen beeinflussen kann.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Immunogen-Design: Der Antikörper wurde gegen ein Peptid innerhalb der Aminosäuren 100-200 von humanem HLA-DRA hergestellt, das voraussichtlich die reife Ektodomäne erkennt; Kreuzreaktivität mit anderen Spezies ist nicht garantiert, kann aber bei Bedarf getestet werden.
• Western Blot (WB): Verwenden Sie reduzierende Bedingungen und laufen Sie einen Molekulargewichtsmarker; die detektierte Bande sollte bei ~29 kDa erscheinen. Fügen Sie einen Positivkontroll-Lysat aus humanen B-Zelllinien (z. B. Raji) oder PBMCs hinzu.
• Immunfluoreszenz (IF/ICC): Permeabilisieren Sie Zellen mit 0,1 % Triton X-100, um dem Antikörper Zugang zu intrazellulären Epitopen zu ermöglichen; HLA-DR lokalisiert hauptsächlich auf der Zelloberfläche und in endozytischen Kompartimenten. Verwenden Sie humane APCs oder HLA-DR-exprimierende Zelllinien als Positivkontrollen.
• Immunhistochemie Paraffin (IHC-P): Führen Sie vor der Inkubation eine hitzeinduzierte Antigenretrieval in Citratpuffer (pH 6,0) durch; validieren Sie die Färbung an humanen Lymphgeweben (Mandeln, Milz), von denen bekannt ist, dass sie MHCII exprimieren.
• ELISA: Der Antikörper kann in einem Sandwich-ELISA-Format mit einem passenden Detektionsantikörper verwendet werden; validieren Sie mit rekombinantem HLA-DR-Protein oder peptidbeschichteten Platten.

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