Anti-HLA-DPB1-Kaninchen-Monoklonaler Antikörper für WB, IF-P, IHC-P, ELISA - P04440

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von HLA-DPB1

• HLA-DPB1 ist die Beta-Kette des HLA-Klasse-II-Histokompatibilitätsantigens, ein heterodimeres transmembranes Glykoprotein, das eine zentrale Rolle in der adaptiven Immunantwort spielt, indem es exogene Peptidantigene CD4+ T-Zellen präsentiert. Die prozessierten Peptide, typischerweise 10–30 Reste lang, werden im endosomalen/lysosomalen System auf MHC-Klasse-II-Moleküle geladen.
• Das funktionelle MHC-Klasse-II-Molekül wird als Heterononamer assembliert, bestehend aus drei Alpha-Beta-Heterodimeren, die mit einem Trimer der invarianten Kette (CD74) assoziiert sind. Beim Eintritt in den endosomalen Weg wird CD74 schrittweise durch Proteasen wie Cathepsin S (CTSS) und Cathepsin L (CTSL) gespalten, wobei ein restliches CLIP-Peptid in der Bindungsrinne verbleibt, das dann mit Hilfe des Peptideditors HLA-DM gegen hochaffine antigene Peptide ausgetauscht wird.
• Der Antigenladevorgang findet in einem spezialisierten spät-endosomalen/lysosomalen Kompartiment statt, wo das saure Mikromilieu sowohl die Proteolyse internalisierter Antigene als auch die Peptidaustauschreaktion begünstigt. In B-Zellen wird dieser Prozess weiter durch HLA-DO moduliert, das die Aktivität von HLA-DM reguliert.
• HLA-DPB1 ist ein Mitglied der MHC-Klasse-II-Beta-Ketten-Genfamilie und ist auf dem HLA-DP-Locus auf Chromosom 6 kartiert. Alternativnamen sind DPB1, HLA-DP, HLA-DPB und HLA-DP1B.
• Subzellulär durchläuft HLA-DPB1 den Weg über das endoplasmatische Retikulum und den Golgi-Apparat, bevor es die Zelloberfläche erreicht. Es wird auch in Endosomen, Lysosomen und dem trans-Golgi-Netzwerk nachgewiesen, was sein dynamisches intrazelluläres Routing während der Peptidbeladung und Oberflächenexpression widerspiegelt.
• Das Protein wird als transmembranes Glykoprotein mit einem Signalpeptid, einer einzelnen Transmembranhelix und Disulfidbrücken klassifiziert. Es erfährt N-verknüpfte Glykosylierung und ist ein Mitglied der Immunglobulin-Superfamilie.
• MHC-Klasse-II-Moleküle, einschließlich HLA-DPB1, werden konstitutiv auf professionellen antigenpräsentierenden Zellen wie dendritischen Zellen, B-Zellen und Makrophagen exprimiert, können aber auch auf anderen Zelltypen induziert werden, einschließlich intestinaler Epithelzellen, wo sie an der mukosalen Immunität teilnehmen.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das zur Generierung dieses Antikörpers verwendete Immunogen ist ein synthetisches Peptid, das die Reste 1–100 des humanen HLA-DPB1 umfasst und der N‑terminalen extrazellulären Region entspricht. Diese Region umfasst das Signalpeptid und einen Teil der β1-Domäne, die an der Peptidbindung und der MHC-II-Heterodimerbildung beteiligt ist. Berücksichtigen Sie die Validierung der Epitopzugänglichkeit unter nativen versus denaturierenden Bedingungen für Ihre spezifische Anwendung.
• Für Western Blotting wird unter reduzierenden Bedingungen ein Band bei etwa 29 kDa erwartet. Aufgrund von Glykosylierung und Proteinkomplexbildung können auch Spezies mit höherem Molekulargewicht beobachtet werden. Optimieren Sie Blockier- und Waschbedingungen, um unspezifische Bindung in komplexen Lysaten zu minimieren.
• Bei Immunfluoreszenz (IF-P) und Immunhistochemie (IHC-P) zielt der Antikörper auf ein membrangebundenes Antigen ab. Eine Antigen-Demaskierung unter Verwendung von hitzevermitteltem Citratpuffer (pH 6,0) ist oft vorteilhaft für formalinfixierte, paraffineingebettete Schnitte. Schließen Sie geeignete Isotypenkontrollen und gewebespezifische Positivkontrollen ein, wie z.B. Tonsille oder Lymphknoten, wo HLA-DPB1 hoch exprimiert wird.
• Dieser Antikörper zeigt Kreuzreaktivität mit Maus und Ratte, was auf die Erkennung eines konservierten Epitops hinweist. Bei der Verwendung von Nagetierproben sollten mögliche Unterschiede in der Zelltypendistribution und den Expressionsniveaus von MHC-Klasse-II berücksichtigt werden. Pilotexperimente werden empfohlen, um die Eignung in Ihrem Modellsystem zu bestätigen.
• Für ELISA-Anwendungen kann der Antikörper entweder als Capture- oder als Detektionsreagenz gegen rekombinantes oder natives HLA-DPB1 verwendet werden. Die Kombination mit einem Anti-HLA-DP-Alphaketten-Antikörper kann helfen, den intakten Heterodimer nachzuweisen. Validieren Sie den Assay in der relevanten Probenmatrix, um Interferenzen durch lösliches HLA oder kreuzreaktive MHC-Klasse-I-Moleküle auszuschließen.

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