Anti-Histon H3.3 Kaninchen-monoklonaler Antikörper für WB, IHC-P, ELISA, ChIP, ChIP-seq - P84243

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von Histon H3.3

• Histon-H3-Variante, die konventionelles H3 in Nukleosomen an aktiv transkribierten Genen ersetzt. Es ist die vorherrschende H3-Form in nicht teilenden Zellen und wird unabhängig von der DNA-Synthese abgelagert
• Kernbestandteil von Nukleosomen, der DNA zu Chromatin verpackt und verdichtet, um den Zugang zur Matrize einzuschränken. Dadurch ist es zentral an der Transkriptionsregulation, DNA-Reparatur, DNA-Replikation und chromosomalen Stabilität beteiligt
• Es unterliegt einer komplexen Vielfalt an posttranslationalen Modifikationen (Acetylierungen, Methylierungen, Phosphorylierungen etc.), die den Histon-Code bilden und die Chromatin-Dynamik sowie Genexpression regulieren
• Es ist ausschließlich im Zellkern und auf Chromosomen lokalisiert, angereichert an Regionen mit Nukleosomen-Verdrängung über Genkörper hinweg und markiert transkriptionell aktives Chromatin
• Es wird von zwei Genen kodiert, H3-3A (H3F3A) und H3-3B (H3F3B), die identische Proteinprodukte erzeugen. Es unterscheidet sich von kanonischen replikationsabhängigen H3-Varianten
• Es ist mit Krankheitsvarianten verbunden, die mit geistiger Behinderung und Entwicklungsstörungen einhergehen, was seine zentrale epigenetische Rolle unterstreicht
• Es ist bei Wirbeltieren hochkonserviert mit einem vorhergesagten Molekulargewicht von ca. 15.328 Da. Aufgrund von PTMs wird es in der SDS-PAGE oft bei ca. 15–17 kDa beobachtet

Experimentelle Anleitung und Technische Tipps

• Das Immunogen umfasst die Aminosäuren 57–136 von menschlichem Histon H3.3, eine Region, die an Nukleosomen-Interaktionen beteiligt ist. Dieses Epitop kann konformationsempfindlich sein – erwägen Sie Tests unter nativen und denaturierenden Bedingungen.
• Für WB ist eine Bande bei ca. 15 kDa zu erwarten; validieren Sie in Ihrem spezifischen Probenystem und verwenden Sie geeignete Ladekontrollen (z. B. Gesamt-H3 oder Haushaltsgene).
• Aufgrund der nachgewiesenen Kreuzreaktivität mit Mensch, Maus, Ratte und einem breiten Spektrum anderer Spezies ist ein Vorversuch in nicht standardmäßigen Modellen empfehlenswert.
• Bei ChIP und ChIP-seq optimieren Sie die Crosslinking- und Scherungsbedingungen; die Leistung des Antikörpers sollte mit positiven (aktives Gen) und negativen (stillgelegter Locus) Kontrollregionen überprüft werden.
• Für IHC-P sollten Antigen-Retrieval und Antikörper-Verdünnung empirisch bestimmt werden; ein Kernfärbemuster ist zu erwarten.

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