Anti-Histone H3 Kaninchen polyklonaler Antikörper für WB, IP, IF-P, IHC-P, ELISA - Q16695 / P68431

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung von Histone H3.1t (H3.4)

• Kernkomponente des Nukleosoms: Histone H3.1t ist ein Histon-H3-Variante, die als Kernkomponente des Nukleosoms fungiert, indem sie die DNA wickelt und zu Chromatin verdichtet. Dies begrenzt die Zugänglichkeit der DNA für zelluläre Maschinen und spielt damit eine zentrale Rolle bei der Transkriptionsregulation, DNA-Reparatur, DNA-Replikation und chromosomalen Stabilität.
• Regulation des Histone-Codes: Die Zugänglichkeit der DNA wird durch einen komplexen Satz posttranslationaler Modifikationen an Histonen reguliert, einschließlich Acetylierung, Methylierung, Phosphorylierung, Citrullinierung, ADP-Ribosylierung, Hydroxylierung und Ubiquitinierung, die collectively als Histone-Code bezeichnet werden. Diese Modifikationen sind entscheidend für die epigenetische Regulation.
• Genfamilie und Expression: Diese Variante (kodiert durch das H3-4-Gen, auch bekannt als HIST3H3) gehört zur Histone-H3-Familie und wird spezifisch in testikulären Zellen exprimiert, was auf eine Rolle bei der Chromatin-Reorganisation während der Spermatogenese hindeutet.
• Subzelluläre Lokalisierung: H3.1t lokalisiert sich im Kern und in den Chromosomen, wo es Teil des Nukleosomen-Kernpartikels bildet.
• Strukturelle Merkmale: Das Protein enthält DNA-bindende Domänen und kann durch Isopeptidbindungsbildung und ubiquitinähnliche Konjugation modifiziert werden, was die Nukleosomendynamik und die höherwertige Chromatinstruktur beeinflusst.
• Schlüsselwörter: 3D-Struktur, Acetylierung, ADP-Ribosylierung, Chromosom, Citrullinierung, DNA-Bindung, Hydroxylierung, Isopeptidbindung, Methylierung, Nukleosomenkern, Kern, Phosphoprotein, Proteomics-Identifizierung, Referenzproteom, Ubl-Konjugation.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Immunogen-Design: Der Antikörper wurde gegen ein synthetisches Peptid erzeugt, das einer zentralen Region (aa 36-136) von humanem Histone H3.1t entspricht. Diese Region ist unter H3-Varianten und über Spezies hinweg hochkonserviert, was die breit vorhergesagte Kreuzreaktivität erklären könnte. Forscher sollten die Spezifität für ihre Zielvariante im entsprechenden biologischen Kontext validieren.
• Western Blotting: Ein spezifisches Band bei ca. 15 kDa wird erwartet. Um den Nachweis zu verbessern, verwenden Sie Kernextrakte oder säureextrahierte Histone, da diese Fraktionen an Histonen angereichert sind. Erwägen Sie die Testung sowohl unter denaturierenden als auch nativen Gele-Bedingungen.
• Immunpräzipitation und Immunfluoreszenz: Für IP kann die Vernetzung oder native Bedingungen die Antikörper-Zugänglichkeit aufgrund der Chromatin-Verdichtung beeinflussen. Für IF-P sind Permeabilisierungsschritte (z. B. Triton X-100) typischerweise erforderlich, um nukleäre Histone nachzuweisen. Validieren Sie in positiven und negativen Zelllinien.
• IHC-P und ELISA: Für die Immunhistochemie können Antigen-Retrieval-Methoden (wärmeinduziert oder enzymatisch) die Epitop-Exposition verbessern. In ELISA sollte das Peptid oder das rekombinante Protein verwendet werden, um die Reaktivität zu bestätigen. Fügen Sie immer geeignete Kontrollen ein.

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