Kaninchen-polyklonaler Anti-HIF1AN/FIH1-Antikörper für WB und ELISA - Q9NWT6

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von HIF1AN/FIH1

• HIF1AN (Hypoxie-induzierbarer Faktor 1-Alpha-Inhibitor), auch Faktor hemmend HIF-1 (FIH-1) genannt, ist eine Asparagin-Hydroxylase, die die Hypoxieantwort reguliert.
• Unter Normoxie hydroxyliert sie HIF-1α an Asn-803 in der C-terminalen Transaktivierungsdomäne, blockiert die Rekrutierung von p300/CBP-Koaktivatoren und unterdrückt dadurch die Hypoxie-induzierte Gentranskription.
• Wirkt als direkter Sauerstoffsensor; ihre Hydroxylaseaktivität erfordert molekularen Sauerstoff, Eisen und 2-Oxoglutarat und verbindet so den zellulären Sauerstoffdruck mit der Stabilität und Aktivität von HIF-1α.
• Über HIF-1α hinaus hydroxyliert HIF1AN Asparagin-, Aspartat- und Histidinreste in Ankyrin-Wiederholungsdomänen (ARDs) verschiedener Proteine, darunter NFKB1, NOTCH1, ASB4 und TNKS2, und moduliert dadurch Signalwege außerhalb der Hypoxie.
• Reguliert die Notch-Signalisierung negativ durch Hydroxylierung von NOTCH1, was die myogene Differenzierung beschleunigt; umgekehrt fördert die Hydroxylierung von ASB4 die vaskuläre Differenzierung positiv.
• Die subzelluläre Verteilung umfasst sowohl Kern als auch Zytoplasma mit perinukleärer Akkumulation, was seine Rollen bei der Transkriptionsregulation und zytoplasmatischen Proteininteraktionen widerspiegelt.
• Klassifiziert als Dioxygenase und eisenabhängige Oxidoreduktase; seine aktive Stelle enthält ein mononukleäres Eisenzentrum, das für die Katalyse essenziell ist.

Experimentelle Anleitung und technische Hinweise

• Das Immunogen deckt fast das gesamte HIF1AN-Protein (Reste 1–349) ab, das die katalytische JmjC-Domäne umfasst; dieses Design soll Antikörper generieren, die multiple Epitope erkennen, was die Detektion in denaturierenden und nativen Assays erleichtert.
• Für Western Blot ist eine Bande um 40–41 kDa zu erwarten; die Zugabe eines normoxischen Zelllysats (z. B. HeLa, HEK293) als Positivkontrolle und einer hypoxiebehandelten Probe zur Untersuchung von HIF-1α-Hydroxylierungs-abhängigen Effekten kann aufschlussreich sein.
• Bei der Durchführung von ELISA erwägen Sie die Beschichtung mit rekombinantem HIF1AN oder einem HIF-1α-Peptid; ein Sandwich-ELISA in Kombination mit einem Fangantikörper, der gegen ein anderes Epitop spezifisch ist, kann die Spezifität erhöhen.
• Die vorausgesagte Kreuzreaktivität mit murinem HIF1AN wird gestützt, aber die Leistung sollte mit den entsprechenden Gewebe- oder Zellextrakten bestätigt werden.
• Optimale Antikörperverdünnungen und Assaybedingungen sollten empirisch für jedes experimentelle System bestimmt werden.

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