Anti-HIF1α Kaninchen monoklonaler Antikörper für WB, IF/ICC, ELISA - Q16665

Kerneigenschaften und Parameter des Produkts

Biologischer Hintergrund: HIF1α-Funktion und Lokalisation

• HIF1α ist ein zentraler transkriptioneller Regulator der adaptiven Hypoxieantwort und aktiviert über 40 Gene, die an Sauerstofftransport und metabolischer Anpassung beteiligt sind (Erythropoietin, VEGF, glykolytische Enzyme, etc.). Verwandte Referenzen: PMID:11292861, PMID:11566883, PMID:15465032
• Es bildet ein Heterodimer mit ARNT und bindet an Hypoxie-Antwort-Elemente (HREs) mit der Kernsequenz 5'-TACGTG-3' in Promotoren von Zielgenen. Die transkriptionelle Aktivierung erfordert die Rekrutierung von Koaktivatoren wie CREBBP und EP300 und wird durch NCOA1/NCOA2 und APEX1 verstärkt. Verwandte Referenzen: PMID:16543236, PMID:9887100, PMID:10594042, PMID:10202154
• Zusätzlich zu seinen kanonischen Hypoxie-Rollen ist HIF1α an der axonalen Verteilung von Mitochondrien in Neuronen während Hypoxie beteiligt. Verwandte Referenzen: PMID:19528298
• Bei SARS-CoV-2-Infektion wird HIF1α für die Induktion von Glykolyse und pro-inflammatorischem Zustand in Monozyten benötigt, was die virale Replikation und die Expression von Zytokinen (IL1B, TNF, IL6, Interferone) verstärkt. Verwandte Referenzen: PMID:32697943
• HIF1α ist ubiquitär exprimiert, mit den höchsten Leveln in Niere und Herz; es ist häufig in Krebserkrankungen aufgrund von intratumoraler Hypoxie oder onkogenen Mutationen überexprimiert und zeigt im Vergleich zu normalem Hypophysengewebe eine erhöhte Expression in Hypophysentumoren.
• Das Protein lokalisiert im Zytoplasma, Zellkern und nuklearen Speckles, was sein dynamisches Shuttling und seine transkriptionelle Aktivität widerspiegelt.
• Posttranslationale Modifikationen umfassen Hydroxylierung, Acetylierung, Phosphorylierung, S-Nitrosylierung und Ubiquitinierung, welche die Protein-Stabilität und transkriptionelle Aktivität regulieren.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Der Antikörper wurde gegen ein synthetisches Peptid hergestellt und erkennt voraussichtlich das gesamte HIF1α-Protein in humanen und murinen Spezies. Bestätigen Sie die Reaktivität in Ihrem spezifischen Versuchsmodell.
• Für Western Blot sind Banden bei etwa 83, 93 oder 96 kDa zu erwarten, abhängig von der Isoform-Expression und posttranslationalen Modifikationen; verwenden Sie geeignete Molekulargewichtsmarker und Hypoxie-behandelte positive Kontrollen zur Verifizierung der Detektion.
• Bei Immunfluoreszenz/ICC optimieren Sie die Fixierung und Permeabilisierung, um sowohl zytoplasmatische als auch nukleäre Lokalisationssignale zu erhalten; die Induktion der HIF1α-Stabilisierung durch Hypoxie-Mimetika oder Inkubation bei niedrigem Sauerstoffgehalt vor der Färbung wird empfohlen.
• Für ELISA-Anwendungen validieren Sie das Antikörperpaar mit rekombinantem HIF1α oder Hypoxie-behandelten Zelllysaten, um einen linearen Detektionsbereich und Sensitivität sicherzustellen.
• Da HIF1α unter Normoxie schnell abgebaut wird, behandeln Sie Zellen vorher mit Proteasom-Inhibitoren (z.B. MG132) oder setzen Sie sie Hypoxie aus, um ausreichend Zielprotein für eine robuste Detektion in allen Anwendungen anzureichern.

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