Anti-HIBADH monoklonaler Antikörper für WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA – P31937

Produktkerndaten und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von HIBADH

• HIBADH (3-Hydroxyisobutyrat-Dehydrogenase) ist ein mitochondriales Enzym der Oxidoreduktase-Familie, das NAD als Cofaktor nutzt.
• Es spielt eine Schlüsselrolle im Katabolismus verzweigtkettiger Aminosäuren (Valin, Leucin, Isoleucin), insbesondere bei der Umwandlung von 3-Hydroxyisobutyrat zu Methylmalonat-Semialdehyd.
• Das Protein ist im Mitochondrium lokalisiert, was durch sein mitochondriales Transitpeptid belegt ist; dieses wird abgespalten, um das reife Enzym zu erzeugen.
• Posttranslationale Modifikationen umfassen die Acetylierung, die die enzymatische Aktivität oder Stabilität regulieren kann.
• Eine HIBADH-Expression wurde in Hautfibroblasten nachgewiesen; die Expression in anderen Geweben lässt sich aus seiner metabolischen Funktion ableiten.
• Strukturstudien lieferten eine 3D-Struktur für HIBADH, die das Verständnis des katalytischen Mechanismus und der Substraterkennung unterstützt.
• Das Protein wurde durch direkte Proteinsequenzierung und proteomische Verfahren identifiziert, was sein Vorkommen in menschlichen Mitochondrien bestätigt.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen entspricht den Aminosäuren 37-336 des menschlichen HIBADH (NP_689953.1), wobei das vorhergesagte mitochondriale Transitpeptid (etwa die ersten 36 Aminosäuren) ausgeschlossen ist; der Antikörper erkennt daher wahrscheinlich die reife mitochondriale Form.
• Für den Western Blot (WB) ist eine Bande bei etwa 35 kDa zu erwarten (übereinstimmend mit dem UniProt-Molekulargewicht von 35,3 kDa). Bestätigen Sie die Spezifität durch Verwendung geeigneter positiver und negativer Kontrollen (z. B. HIBADH-überexprimierende Zellen oder Gewebe mit bekannter Expression).
• Bei der Immunhistochemie (IHC-P) und Immunfluoreszenz (IF/ICC) sollte ein mitochondriales Färbemuster beobachtet werden. Kolokalisierung mit mitochondrialen Markern kann zur Validierung der Spezifität beitragen.
• Der Antikörper kreuzreagiert mit menschlicher, muriner und rätlicher HIBADH; überprüfen Sie bei Verwendung von Nagerproben die Sequenzhomologie im Immunogenbereich, um eine vergleichbare Reaktivität sicherzustellen.
• Für ELISA-Anwendungen empfehlen wir, das rekombinante Immunogen als Positivkontrolle zu verwenden und die Antikörperkonzentration für ein optimales Signal-Rausch-Verhältnis zu titrieren.
• Um unspezifische Bindung zu minimieren, werden geeignete Blockierungspuffer (z. B. 5 % fettfreie Milch oder BSA) und eine optimierte Verdünnung empfohlen.

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