Anti-HFE Monoklonaler Antikörper für WB, ELISA - Q30201

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: HFE-Funktion und -Lokalisierung

• HFE (Hereditäres Hämochromatose-Protein), auch als HLA-H bezeichnet, ist ein Membranprotein, das an den Transferrin-Rezeptor (TFR) bindet und dessen Affinität für eisenbeladenes Transferrin reduziert, wodurch die Eisenaufnahme reguliert wird.
• Das Gen, das HFE codiert, gehört zur MHC-Klasse-I-Familie; Mutationen im HFE-Gen sind mit der hereditären Hämochromatose, einer Störung des Eisenüberladung, assoziiert, was seiner Einstufung als Krankheitsvariantenprotein entspricht.
• Laut UniProt wird HFE in allen getesteten Geweben außer dem Gehirn exprimiert, was auf eine breite, aber nicht allgegenwärtige Verteilung hinweist.
• Subzellulär lokalisiert sich HFE an die Zellmembran, wo es mit TFR und anderen eisenbezogenen Proteinen interagiert, um die systemische Eisenhomöostase zu steuern.
• Alternatives Spleißen von HFE erzeugt mehrere Isoformen, die unterschiedliche Gewebeverteilungen und funktionelle Rollen haben können; die vollständige, membrangebundene Form ist die primäre Spezies.
• Posttranslationale Modifikationen umfassen Glykosylierung und die Bildung von Disulfidbrücken, die für die korrekte Faltung und die Expression an der Zelloberfläche entscheidend sind.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen entspricht einem synthetischen Peptid, das die Aminosäuren 249–348 von humanem HFE abdeckt, einen Bereich, der einen Teil der extrazellulären Domäne, die Transmembranhelix und den zytoplasmatischen Schwanz umfasst. Dieses Design ermöglicht möglicherweise die Detektion sowohl der Volllängenform als auch bestimmter trunkierter Formen im denaturierenden Western Blot.
• Für den Western Blot sollten Sie Gesamtproteinlysate aus HFE-exprimierenden Geweben wie Leber oder Plazenta verwenden (ausgenommen Gehirn, wo HFE fehlt). Optimieren Sie die Blockierungs- und Antikörperverdünnungsbedingungen für Ihren spezifischen Probentyp.
• Für ELISA-Anwendungen kann die Leistung des Antikörpers vom Assay-Format (direkt, indirekt oder Sandwich) abhängen. Validieren Sie den Klon in Ihrer Zielprobematrix und erwägen Sie die Kombination mit einem Fangantikörper, der ein anderes Epitop erkennt.
• Da HFE ein Membranprotein ist, stellen Sie sicher, dass während der Probenvorbereitung eine ordnungsgemäße Solubilisierung und Denaturierung erfolgt, um das Epitop freizulegen, insbesondere wenn das Immunogen teilweise intrazellulär ist.
• Eine Kreuzreaktivität wurde für humanes HFE berichtet; für die Verwendung mit anderen Spezies sollte die Sequenzhomologie überprüft werden.

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